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气相色谱（GC）
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主题：【第六届原创】气相色谱法测定酱油中甜蜜素含量的探讨

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abcdefghijkl123
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发表于：2011/08/07 11:08:06 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为abcdefghijkl123原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
摘要：建立了毛细管气相色谱法测定酱油中甜蜜素含量的分析方法。采用RTX-WAX毛细管色谱柱和氢火焰检测器测定，外标法定量。[结果]样品加标平均回收率为93.7%-99.3%，相对标准偏差（RSD）为2.5%-4.7%。实验结果表明，该方法简便、快速，适合酱油甜蜜素含量的测定。



关键词：酱油  甜蜜素  气相色谱



甜蜜素又名环己基氨基磺酸钠（C6H12NaO3S），是用来增加食品甜度的化学调味品。由于甜蜜素的甜度只有糖精的三十分之一、口感好、价格低廉，被用来代替食糖在饮料、糕点、蜜饯等多种食品的生产中广泛应用。由于过量的甜蜜素等甜味剂会对人体健康产生一定的影响，如:损害人体的肝脏和神经系统等，因此，强制性国家标准GB2760-2007中明确规定甜味剂是限范围、限量使用的食品添加剂，其本身产品质量也有国家标准（GB12488－2008）[3]。按照国家的有关规定，酱油中甜蜜素不得检出。

      照国标《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》（GB/T5009.97-2003）中规定的方法，目前对酱油采用液体试样的前处理方式，即称取样20g左右于100ml比色管，置冰浴中。加入5ml50g/L亚硝酸钠溶液，5ml100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min,并经常摇动，然后加入10ml正已烷，5g氯化钠，摇匀，待分层后吸出已烷层，离心后进行GC分析。但是，在实际操作过程中，以上样品存在着乳化现象严重、不易分离等缺点，影响了测定甜蜜素含量的准确性。因此，本文对酱油的前处理方法进行改进，探讨了采用固体试样的前处理方法及对气相色谱分析的影响，提高甜蜜素定量分析的准确性。

1材料与方法：

1.1仪器和试剂

      岛津GC2010带FID检测器，配备A oc-20i 自动进样器和GCsoluthion 工作站， 长沙平凡仪器仪表有限公司：TG16-Ⅱ型高速离心机。正己烷（分析纯）、氯化钠（分析纯）、亚硝酸钠（分析纯），浓硫酸（分析纯）、RO水。标准溶液配制：甜蜜素标准品（中国计量科学研究院）用RO水配制成10mg/ml标准储备液。

1.2色谱分析条件：

气相色谱柱采用岛津公司RTX-WAX毛细管色谱柱，30m×0.25um×0.25rm（膜厚），分流/不分流进样口，进样温度200℃，分流进样，分流比10：1 载气：高纯氮气（纯度99.999%），氮气流速：40ml/min，空气流速：300ml/min, 氢气流速：30ml/min,进样量：2.0ul，检测器：FID，检测器温度：220℃,柱温：80℃保留1min然后以5℃/min升至150℃保持10min。

1.3标准曲线的制作（与国标相同）

精确称取1.0000g固体甜蜜素标准样品，加入水溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制成浓度为10 mg/mL的甜蜜素标准溶液。分别准确吸取该标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于100 mL带塞比色管中，加入蒸馏水至20 mL，混匀后置于冰浴中。依次分别加入5 mL亚硝酸钠溶液(50 g/L)和硫酸溶液(100 g/ L)，摇匀后在冰浴中放置30 min并经常摇动。分别准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置于涡漩混合器上振动1 min，待静置分层后分离出己烷层，取2 .0L样品注入仪器，进行气相色谱分析。
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abcdefghijkl123
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2011/8/7 11:08:30 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.4样品处理
称取10.0g左右样品于烧杯中，加水定容至100ml，摇匀，再准确吸取20 mL溶液于100 mL带塞比色管中，置冰浴中。依次分别加入5 mL亚硝酸钠溶液(50 g/L)和硫酸溶液(100 g/ L)，摇匀后在冰浴中放置30 min并经常摇动。分别准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，摇匀后置于涡漩混合器上振动1 min， 然后移入50ml离心管中，以4000r/min离心10min，用吸管取出上层正己烷供气相色谱分析。
2结果与讨论
2.1样品处理方法的改进
1、GB/T5009.97-2003中的样品处理方法
准确称取20.0g样品于100 mL带塞比色管中，置冰浴中。依次分别加入5 mL亚硝酸钠溶液(50 g/L)和硫酸溶液(100 g/ L)，摇匀后在冰浴中放置30 min并经常摇动。分别准确加入10 mL正己烷，5 g氯化钠，振摇80次，待静置分层后吸出上层正己烷于10ml带塞离心管中进行离心分离，上层正己烷供气相色谱分析。在实际检测中，由于样品处理过程中产生大量的泡沫，静置后乳化极为严重，无法分层，不能吸出上层正己烷层。本文本文采用1.4样品前处理方法，减少称样量及试剂用量；采取直接离心而无需将存在于正己烷中的环己醇亚硝酸酯取出后再离心。从而简化了前处理过程，缩短了分析时间，同时解决了乳化不分层的难题。
2、考滤到样品在前处理过程中乳化现象极为严重，因而参照固体样品进行检测，结合第1点，从而解决了乳化不分层的难题。
3、样品前处理时
若采用液体样品的处理方法称取20g样至100ml比色管进行分析，我也进行了分析，其结果如下：
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abcdefghijkl123
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2011/8/7 11:09:06 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


经过试验其回收率大约在65~80%之间，不是令人非常满意。
4、国标中采用的色谱条件为80℃恒温操作,采用U形不锈柱。目前石英毛细管柱较为普及，且分离较果较好，因此采用石英毛细管柱。另外在实验中发现: 在恒温条件下，正己烷溶剂与甜蜜素的保留时间非常接近，溶剂峰与甜蜜素峰分离度不好。为了使这两个峰形完全分离、并且减少样品中一些沸点较高的未知组分在色谱柱内的残留，本文对标准中恒温方法进行了改进，采用程序升温的方法进行实验，甜蜜素标准品与溶剂峰得到了很好的分离。其色谱图见下图
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2011/8/7 11:12:21 Last edit by abcdefghijkl123
abcdefghijkl123
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2011/8/7 11:13:20 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


2.2标准曲线的线性范围

在上述实验条件下，以甜蜜素含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制了标准曲线。标准曲线为Y=8.944522e-0.07*X-4.60177-002，相关系数R=0.9987  R2=0.997568甜蜜素含量在0.1~1.0 mg/mL范围内有很好的线性关系。

2.3测定的精密度

取采用固体试样的前处理方法得到的酱油样品进行了六次平行试验，计算了精密度，其结果如下。因此，从以上数据可以看出，经固体试样的前处理方法的气相色谱具有很好的精密度。
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abcdefghijkl123
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2011/8/7 11:14:23 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


2.4回收率实验

在以上的酱油样品中分别加入不同量的10 mg/mL甜蜜素标准溶液后进行测定，考察了回收率的情况。通过实验发现: 样品的标准添加回收率在93.7~99. 3%之间，回收率令人满意。

2.5 实验中注意事项

样品处理过程中，加入5 ml 50g/L亚硝酸钠溶液，5ml 100g/L硫酸溶液，摇匀，应注意开始振摇时应缓慢，并不时打开离心瓶盖放气，以免离心瓶盖被冲开，液体飞溅，造成人身损害及实验事故。

3、结论

对于酱油样品，参照固体试样的前处理方法，同时在前处理过程中先进行离心，再吸出正己烷的方法对解决乳化问题有很好的效果，气相色谱分析具有良好的精确度和回收率。另外，采用石英毛细管柱及程序升温可以更好地分离溶剂峰与甜蜜素峰，还可以减少样品中沸点较高的未知物质在色谱柱中的残留，保护色谱柱,减少杂质的干扰。

参考文献：

[1] 食品卫生标准.GB2760-2011

[2] 食品中环己基氨基磺酸钠的测定. GB/T5009.97-2003。

[3]食品添加剂环己基氨基磺酸钠（甜蜜素）.GB12488－2008
附件：
气相色谱法测定酱油中甜蜜素含量的探讨.doc
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2011/8/7 11:15:33 Last edit by abcdefghijkl123
阿宝
lpr20
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2011/8/7 11:19:19 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主这个作品是已经发表的还是准备投稿的？
写的很详细，没有样品的色谱图吗？另外，那个溶剂峰后面的是目标峰吧？出峰有点早，好像不到两倍死时间，可以适当的降低下温度，让峰后移一些
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qqqid
qqqid
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2011/8/8 0:46:34 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
GB/T5009.97 里面样品处理有2类。一类是饮料类，一类是蜜饯类。
这个方法好象本身就没有提到可以检测酱油这样的样品。

楼主这句话：“按照国家的有关规定，酱油中甜蜜素不得检出。”
是哪个规定呀？我怎么没查到。

酱油是咸的，如果我是做酱油的，怎么也不会加甜蜜素这样的甜味剂在里面。
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happy水中月
lianlxh
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2011/8/8 7:12:19 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qqqid(qqqid) 发表:
GB/T5009.97 里面样品处理有2类。一类是饮料类，一类是蜜饯类。
这个方法好象本身就没有提到可以检测酱油这样的样品。

楼主这句话：“按照国家的有关规定，酱油中甜蜜素不得检出。”
是哪个规定呀？我怎么没查到。

酱油是咸的，如果我是做酱油的，怎么也不会加甜蜜素这样的甜味剂在里面。
[/quote
虽然酱油是咸的，但是有的时候为了调味，也是需要加点甜的。
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abcdefghijkl123
abcdefghijkl123
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2011/8/8 13:05:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酱油中的甜蜜素GB2760-2011规定为不得检出啊，有些酱油样品我们检出还挺高的，达0。11g/kg啊
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凯子蒸包子
zk19831125
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2011/8/9 13:26:03 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酱油发酵过程中会不会产生环己醇或者类似物质导致假阳性？
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abcdefghijkl123
abcdefghijkl123
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2011/8/9 19:22:03 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个不会的，只有白酒或黄酒才会的
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