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因工作需要,需要对酮咯酸氨丁三醇中的残留有机溶剂乙醇和1,2-二氯乙烷进行方法学研究,乙醇为三类溶剂,药典规定限度为0.5%,1,2-二氯乙烷为一类溶剂,药典规定限度为0.0005%,因为1,2-二氯乙烷的限度较低,在FID检测器下很难检测,故需要用到ECD检测器检测1,2-二氯乙烷。 方法学研究为,方法一,乙醇的检测;方法二,1,2-二氯乙烷的检测。1.1方法概述应用GC外标法对酮咯酸氨丁三醇中的残留有机溶剂乙醇进行定量分析。载气:氮气;检测器:FID。1.2对照品及样品名 称 | 来源 | 批号 |
酮咯酸氨丁三醇样品 | 某医药企业 | 120201 |
乙醇 | 西陇化工股份有限公司 | 1107011 |
1.3仪器和仪器参数气相色谱仪型号:岛津公司GC-2010天平型号:梅特勒公司XS105顶空进样器型号:DANI公司 HSS86.50色谱柱类型:DB-624 规格30m×0.53mm×3.0µm
载气:氮气
柱温:50 ℃
检测器:FID检测器温度: 250℃;进样口温度: 200℃;
流速: 3.0 ml/min;进样量: 1.0ml;分流比: 10:1
样品盘平衡温度: 80℃;定量环温度: 90℃;
传输线温度: 100℃;样品盘平衡时间: 30min1.4溶液配制对照溶液:准确称取乙醇50mg于100ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,精密移取3ml置于20ml顶空瓶中,密封即得对照溶液。准确称取样品0.3g,置于20ml顶空瓶中,加水3.0ml,密封即得供试品溶液。1.5验证内容及结果1.5.1系统适用性试验方法:取酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液,依法连续进样5次,记录乙醇峰面积的相对标准偏差(RSD%)。乙醇峰面积的相对标准偏差RSD应不大于10%,乙醇的理论塔板应不小于10000,乙醇的拖尾因子应不大于1.5。结果:序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | RSD% |
A乙醇 |
905389.6 |
869116.9 |
831750.9 |
847218.0 |
904148.3 |
3.9% |
理论塔板 |
30789.6 |
30620.2 |
30097.7 |
30618.3 |
30803.9 |
------- |
拖尾因子 |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
------- |
1.5.2专属性及峰定位试验方法:A、空白溶剂色谱图 精密量取3ml水置于顶空瓶中,密封,依法进样,得空白溶剂色谱图。B、乙醇峰定位 称取适量乙醇置于20ml顶空瓶中,加水3.0ml,密封,依法进样,得乙醇峰定位色谱图。C、样品溶液 准确称取0.3g样品,置于20ml顶空瓶中,加水3.0ml,密封,依法进样,得样品溶液色谱图。D、专属性溶液 精密称取0.3g样品,置于20ml顶空瓶中,加对照溶液3ml,密封,得专属性溶液。依法进样,得专属性溶液色谱图。结果: 名称 | 保留时间(min) | 理论塔板 | 拖尾因子 |
乙醇 | 4.238 | 30667.3 | 1.2 |
1.5.3线性试验方法:对照贮备溶液:准确称取乙醇100mg(实际称重 100.6 mg)于100ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀即得对照储备溶液。依次精密量取对照储备溶液6.0ml(120%)、5.0ml(100%)、4.0ml(80%)、2.5ml(50%)、1.0ml(20%)、0.5ml(10%),分别置于10ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,各取3.0ml置20ml顶空瓶中,密封,作为线性试验溶液,依法测定,记录峰面积,以乙醇峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,进行线性回归,得回归方程。乙醇线性回归方程的相关系数应>0.99。结果:1.5.4溶液稳定性试验方法:依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液,并于配制后0h、1h、2h、4h、6h、8h依法进样分析,记录乙醇峰面积,计算乙醇峰面积的RSD(%)。乙醇峰面积的RSD≤10%。结果:进样时间 | 0 | 1h | 2h | 4h | 6h | 8h | RSD% |
A乙醇 | 1060939.2 | 1112721.2 | 934277.7 | 983376.1 | 982098.1 | 1127851.2 | 7.7% |
1.5.5定量限与检测限方法:精密量取线性贮备溶液适量,加水稀释成一系列不同浓度的溶液,摇匀后进样分析,当组分的信噪比S/N=10±1时,即为其定量限;当组分的信噪比S/N=3±1时,即为其检测限。结果:定量限 | 检测限 |
杂质名称 | 乙醇 | 杂质名称 | 乙醇 |
S/N | 10 | S/N | 4 |
浓度(ppm) | 3.3 | 浓度(ppm) | 1.1 |
噪音 | 25微伏 |
1.5.6精密度1.5.6.1重复性试验方法:精密称取酮咯酸氨丁三醇6份,每份0.3g,分别置于20ml顶空瓶中,加水3ml,密封,得6份供试品溶液。依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液一份,按测定方法分析,记录各峰面积,计算各样品中残留溶剂的含量。样品中乙醇含量的RSD≤10%。结果:样品序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
RSD% |
样品质量(mg) | 301.2 | 303.1 | 299.5 | 300.2 | 298.5 | 301.6 | ----- |
乙醇(%) | 0.034 | 0.035 | 0.033 | 0.031 | 0.031 | 0.034 | 4.5% |
1.5.6.2中间精密度试验方法:依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液。分析人员A于第一天精密称取样品6份,每份0.3g,分别置于20ml顶空瓶中,加水3ml,密封,得6份供试品溶液;第二天分析人员A和B按相同方法再各配制6份供试品溶液,按测定方法进样分析,记录峰面积,计算乙醇的含量,计算不同分析人员同一天测定结果和同一人员不同天的测定结果(n=18)的RSD(%)。不同分析人员同一天测定结果和同一人员不同天的测定结果的RSD≤15%。结果:供试品溶液 | 样品质量(mg) | 对照溶液浓度(mg/ml) | 乙醇% |
第一天A | 1 | 301.2 | 0.521 | 0.034 |
2 | 303.1 | 0.521 | 0.035 |
3 | 299.5 | 0.521 | 0.033 |
4 | 300.2 | 0.521 | 0.031 |
5 | 298.5 | 0.521 | 0.031 |
6 | 301.6 | 0.521 | 0.034 |
第二天A | 1 | 300.5 | 0.491 | 0.036 |
2 | 299.1 | 0.491 | 0.038 |
3 | 298.3 | 0.491 | 0.037 |
4 | 298.9 | 0.491 | 0.036 |
5 | 300.6 | 0.491 | 0.038 |
6 | 301.7 | 0.491 | 0.037 |
第二天B | 1 | 298.5 | 0.493 | 0.036 |
2 | 298.7 | 0.493 | 0.033 |
3 | 299.4 | 0.493 | 0.036 |
4 | 301.2 | 0.493 | 0.038 |
5 | 300.5 | 0.493 | 0.036 |
6 | 299.6 | 0.493 | 0.037 |
RSD% | --- | ---- | 6.1% |
1.5.7回收率试验方法:精密称取已知溶残含量的酮咯酸氨丁三醇样品0.3g,共9份,分置于20ml顶空瓶中,分别精密加入10.0%对照溶液3.0ml、50.0%对照溶液3.0ml、100.0%对照溶液3.0ml,各3份,密封,即得回收率试验供试品溶液。然后配制对照溶液一份,依法进样分析,计算回收率。要求乙醇在3个浓度(10%、50%、100%)的回收率均在80%~120%范围内。结果: | 相对浓度 | 序号 | 样品质量(mg) | 已知量(mg) | 加入量(mg) | 测得量(mg) | 回收率% | 平均回收率% |
乙醇 | 10.0% | 1 | 300.6 | 0.1052 | 0.1515 | 0.2622 | 103.60 | 103.9 |
2 | 302.1 | 0.1057 | 0.1515 | 0.2676 | 106.86 |
3 | 299.8 | 0.1049 | 0.1515 | 0.2584 | 101.28 |
50% | 1 | 300.2 | 0.1051 | 0.7575 | 0.8254 | 95.09 | 99.4 |
2 | 302.6 | 0.1059 | 0.7575 | 0.8434 | 97.36 |
3 | 304.6 | 0.1066 | 0.7575 | 0.9076 | 105.75 |
100% | 1 | 310.2 | 0.1086 | 1.515 | 1.8063 | 112.06 | 106.5 |
2 | 300.4 | 0.1051 | 1.515 | 1.6832 | 104.16 |
3 | 299.7 | 0.1049 | 1.515 | 1.6684 | 103.20 |
1.5.8耐用性试验方法:依法配制对照溶液4份,按如下方法改变色谱条件,进样分析,乙醇的理论塔板不得低于10000,拖尾因子不得大于1.5。
色谱条件改变项目 |
改变后条件 |
柱温 |
48℃ |
柱温 |
52℃ |
流速 |
2.5ml/min |
流速 |
3.5ml/min |
要求乙醇的理论塔板不得低于10000,拖尾因子不得大于1.5。结果:名称 | 乙醇理论塔板 | 乙醇拖尾因子 |
柱温48℃ | 30538.5 | 1.2 |
柱温52℃ | 30917.7 | 1.2 |
流速2.5ml/min | 34494.1 | 1.2 |
流速3.5ml/min | 27301.8 | 1.2 |
1.6实际样品检测方法:依质量标准草案,配制一份对照溶液,3批供试品溶液,依法进样分析,按外标法计算3批样品中乙醇的含量。 样品中乙醇含量不得超过0.5%。结果:批号 | 样品质量(mg) | 对照溶液浓度(mg/ml) | 乙醇含量(%) |
120201 | 300.8 | 0.495 | 0.04% |
120202 | 301.2 | 0.495 | 0.04% |
120203 | 299.7 | 0.495 | 0.1% |
2.1方法概述应用GC外标法对酮咯酸氨丁三醇中的1,2-二氯乙烷进行定量分析。载气:氮气;检测器:ECD。2.2对照品及样品名 称 | 来源 | 批号 |
酮咯酸氨丁三醇样品 | 某医药企业 | 120201 |
1,2-二氯乙烷 | 上海凌峰化学试剂有限公司 | 20100831 |
2.3仪器和仪器参数气相色谱仪型号:岛津公司GC-2010天平型号:梅特勒公司XS105色谱柱型号:HP-1 规格:30m*0.53mm*5.0μm载气类型:氮气柱温:60℃检测器类型:ECD 检测器温度:250℃进样口温度200℃ 柱流速6ml/min进样量2μL2.4溶液配制对照溶液:准确称取1,2-二氯乙烷10mg于100ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,从中精密移取1.00ml,置于另一100ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,即得对照溶液。供试品溶液:准确称取样品1.0g,置于5ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,即得供试品溶液。2.5验证内容及结果2.5.1系统适用性试验方法取酮咯酸氨丁三醇1,2-二氯乙烷对照溶液,依法连续进样5次,记录1,2-二氯乙烷峰面积的相对标准偏差(RSD%)。1,2-二氯乙烷峰面积的相对标准偏差RSD应不得大于5%,1,2-二氯乙烷的理论塔板不得低于5000,1,2-二氯乙烷的拖尾因子不得大于1.5.结果序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | RSD% |
A二氯乙烷 | 80906.4 |
77849.9 |
83086.7 |
82828.3 |
83410.7 |
2.8% |
理论塔板 | 7480.8 |
7422.3 |
7099.3 |
8135.6 |
7262.2 |
---- |
拖尾因子 | 1.1 |
1.1 |
1.1 |
1.0 |
1.1 |
---- |
2.5.2专属性及峰定位试验方法A、空白溶剂色谱图 取纯化水,依法进样,得空白溶剂色谱图。B、1,2-二氯乙烷峰定位 称取适量1,2-二氯乙烷,置100ml容量瓶中。依法进样,得1,2-二氯乙烷峰定位色谱图。C、样品溶液 准确称取1g样品,置于5ml容量瓶中,用水稀释定容至刻度,摇匀,依法进样,得样品溶液色谱图。D、专属性溶液 准确称取1g样品,置于5ml容量瓶中,用对照溶液稀释定容至刻度,摇匀,得专属性溶液。依法进样,得专属性溶液色谱图。结果 名称 | 保留时间(min) | 理论塔板 | 拖尾因子 |
1,2-二氯乙烷 | 5.497 | 8087.2 | 1.0 |
2.5.3定量限与检测限方法精密量取线性贮备溶液适量,加水稀释成一系列不同浓度的溶液,摇匀后进样分析,当组分的信噪比S/N=10±1时,即为其定量限;当组分的信噪比S/N=3±1时,即为其检测限。结果定量限 | 检测限 |
杂质名称 | 1,2-二氯乙烷 | 杂质名称 | 1,2-二氯乙烷 |
S/N | 10 | S/N | 4 |
浓度(ppm) | 0.17 | 浓度(ppm) | 0.08 |
噪音 | 35μV |
2.6实际样品检测方法配制一份对照溶液,3批供试品溶液,依法进样分析,按外标法计算3批样品中1,2-二氯乙烷的含量。样品中1,2-二氯乙烷的含量不得超过0.0005%。 结果批号 | 样品质量(mg) | 对照溶液浓度(µg/ml) | 1,2-二氯乙烷含量(%) |
120201 | 1001.2 | 1.02 | 未检出 |
120202 | 1000.3 | 1.02 | 未检出 |
120203 | 1001.5 | 1.02 | 未检出 |