主题:【求助】不同色谱柱在同一系统,同样流动相,相同进样体积下,峰面积会相差两倍多吗

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jeccy_jin
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遇到个奇怪的问题,也可能是经验太少以前没遇上,诚恳求教。

最近做一个样品,对照品在不同色谱柱上峰面积相差两倍多。

讲讲过程:一共换用了四种色谱柱,其中三根的峰面积有些微差别,剩下那一款比其他的色谱柱峰面积低了两倍多。尽管我认为出峰时间导致的差异不会这么大,还是更换了几次流动相比例,对照品的表现是:在同一款色谱柱上,流动相比例改变对峰面积的影响不超过5%,然后我更改了进样体积(时间短,没做线性),从同一色谱柱上来看,进样体积的变化率与峰面积变化率一致;同时,相同进样体积的峰面积重现性也不错。 通过以上处理,个人感觉是由色谱柱填料类型造成的峰面积差异——

我的问题是,不同色谱柱在同一系统,同样流动相,相同进样体积下,峰面积会相差两倍多吗?
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首先谢谢关注。

回答:出峰时间,仅就那根特殊色谱柱来说,调整出峰时间既有在其他色谱柱前出峰的,也有之后出峰的,前面我可能忘了表述,四款色谱柱粒径并不全相同。因为手边色谱柱并不很全,用过1.8um,3.5um开发方法,峰面积都差不多,后来找到这只填料相近的5um色谱柱,打算用它来做样品的时候发现峰面积严重缩减,所以上来提问。

说到峰高,这只色谱柱自身调整过出峰时间,从2分多钟到6分多钟都有,峰高是变化的,但是自身上峰面积并未发现很大的差异。它的峰高比其他色谱柱相近时间出峰的稍微高一些。

另:对称因子什么的参数表现不错,5um柱等度下理论塔板数在8k左右,对称因子大约1.04左右(配的几个对照品混标),感觉是不错的,本来想用它做样品,但是响应降了这么多,找不到原因的话不敢轻易用啊。

原文由 houjjun(houjjun) 发表:
出峰时间和峰高相差多少
houjjun
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回答:出峰时间,仅就那根特殊色谱柱来说,调整出峰时间既有在其他色谱柱前出峰的,也有之后出峰的,前面我可能忘了表述,四款色谱柱粒径并不全相同。因为手边色谱柱并不很全,用过1.8um,3.5um开发方法,峰面积都差不多,后来找到这只填料相近的5um色谱柱,打算用它来做样品的时候发现峰面积严重缩减,所以上来提问。

说到峰高,这只色谱柱自身调整过出峰时间,从2分多钟到6分多钟都有,峰高是变化的,但是自身上峰面积并未发现很大的差异。它的峰高比其他色谱柱相近时间出峰的稍微高一些。

另:对称因子什么的参数表现不错,5um柱等度下理论塔板数在8k左右,对称因子大约1.04左右(配的几个对照品混标),感觉是不错的,本来想用它做样品,但是响应降了这么多,找不到原因的话不敢轻易用啊。

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出峰时间和峰高相差多少
哦,这样呀,这就不大好说了。另外也有可能是是这根色谱柱的柱容量不大,而进样量或浓度较大,可以参考下,但这种可能性好像并不大
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2013/10/12 21:54:48 Last edit by jncxyy2012
jeccy_jin
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考虑过容量问题,所以减少进样体积,结果面积与体积成比例减少。。。

貌似真的是由填料不同造成,但是原理呢?

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回答:出峰时间,仅就那根特殊色谱柱来说,调整出峰时间既有在其他色谱柱前出峰的,也有之后出峰的,前面我可能忘了表述,四款色谱柱粒径并不全相同。因为手边色谱柱并不很全,用过1.8um,3.5um开发方法,峰面积都差不多,后来找到这只填料相近的5um色谱柱,打算用它来做样品的时候发现峰面积严重缩减,所以上来提问。

说到峰高,这只色谱柱自身调整过出峰时间,从2分多钟到6分多钟都有,峰高是变化的,但是自身上峰面积并未发现很大的差异。它的峰高比其他色谱柱相近时间出峰的稍微高一些。

另:对称因子什么的参数表现不错,5um柱等度下理论塔板数在8k左右,对称因子大约1.04左右(配的几个对照品混标),感觉是不错的,本来想用它做样品,但是响应降了这么多,找不到原因的话不敢轻易用啊。

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哦,这样呀,这就不大好说了。另外也有可能是是这根色谱柱的柱容量不大,而进样量或浓度较大,可以参考下,但这种可能性好像并不大
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2013/10/12 21:55:39 Last edit by jncxyy2012
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考虑过容量问题,所以减少进样体积,结果面积与体积成比例减少。。。

貌似真的是由填料不同造成,但是原理呢?

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首先谢谢关注。

回答:出峰时间,仅就那根特殊色谱柱来说,调整出峰时间既有在其他色谱柱前出峰的,也有之后出峰的,前面我可能忘了表述,四款色谱柱粒径并不全相同。因为手边色谱柱并不很全,用过1.8um,3.5um开发方法,峰面积都差不多,后来找到这只填料相近的5um色谱柱,打算用它来做样品的时候发现峰面积严重缩减,所以上来提问。

说到峰高,这只色谱柱自身调整过出峰时间,从2分多钟到6分多钟都有,峰高是变化的,但是自身上峰面积并未发现很大的差异。它的峰高比其他色谱柱相近时间出峰的稍微高一些。

另:对称因子什么的参数表现不错,5um柱等度下理论塔板数在8k左右,对称因子大约1.04左右(配的几个对照品混标),感觉是不错的,本来想用它做样品,但是响应降了这么多,找不到原因的话不敢轻易用啊。

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出峰时间和峰高相差多少
哦,这样呀,这就不讨好说了。另外也有可能是是这根色谱柱的柱容量不大,而进样量或浓度较大,可以参考下,但这种可能性好像并不大
那这就不知道了
mxt07
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不知道你用的几根柱子的填料有什么差别,填料的差别可能会对结果产生一定程度的影响。如果结果相近的柱子其中的填料是相同的,差异大的则不同,那很可能就是这方面的问题。

针对差异较大的柱子,调整一下流动相,可能会产生一定程度的影响。
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