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主题：【第六届原创】在安捷伦工作站上面进行同位素（及多离子加和）内标曲线法定量过程简单介绍

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x射线仪器发表于：2013/08/29 22:14:23 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为jimzhu原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

在安捷伦工作站上面进行同位素（及多离子加和）内标曲线法定量过程简单介绍

先简单的回顾一下内标法，内标法就是在待测的样品中准确加入一定量的内标物，根据被测物和内标物的量及其在（在质谱中是质量色谱图）色谱图相应的峰面积比取出此被测定组分的含量。

样品中加入内标物，利用被测物与内标物校正因子的比值不变来进行定量的。

内标法的优点：

进样量不严格要求；内标的加入消除了由于进样量、仪器不稳定等因素带来的系统误差；只对欲分析的组分峰做校正。

内标法的缺点：

每次需要准确称量内标物和样品。

必须加一个组分进到样品，有可能增加面积测量误差。

作为内标的化合物其化学性质和保留时间最好都应和目标化合物相似（理想状态）。但它必须能按保留时间或 m / z 值来和样品区分。

同位素标记目标化合物是一个理想的内标物，它可以由其离子和目标化合物的M/Z值区别开。运用同位素标记化合物做内标物，其化学性质、色谱特性等都与目标化合物一致，因此校正精度更高。目标物和其同位素化合物的保留时间一致，单靠色谱是没有办法区分开的，而质谱有选择离子模式，可以很好的把目标物和其同位素标记物分离开来。

下面简单介绍一下在安捷伦的工作站上面进行同位素（及多离子加和）内标曲线法定量简单过程。

1 实验部分：

1.1仪器与装置

Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪，带有Gerstel的MPS-X多功能自动进样系统（顶空进样器）。

1.2标样和样品：

DMS （dimethyl sulfide）, 纯度：99%安谱公司（TCI）提供

d6-DMS (dimethyl-d6 sulfide), 纯度： 98.7% （NMR 99.7 atom % D）

样品：市场样品

1.3色谱条件色谱柱：DB-Innowax (Agilent)色谱柱(30m×0. 25 mm ( i.d.)×0.25μm)毛细管柱；

柱温：40℃保持10 min或更长

载气（He）流速1.6 mL/min，

进样口温度250℃，

分流比20:1,

1.4质谱条件电子轰击（EI）离子源，电子能量70eV；

传输线温度280 ℃；

离子源温度230 ℃；

四级杆温度，150℃。

SCAN扫描范围：29-400。SIM按化合物的特征离子设定。

1.5 进样方式

标样标液系列和样品置于多功能进样器的顶空进样装置上面。平衡时间：20min, 平衡温度：40℃，进样量1ml。当然可以用液体进样测定更容易简单些，或许准确性更高。这里是由于DMS（沸点37.5）度的挥发性较高而选用顶空测定。

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2013/8/29 22:15:04 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2 标准曲线的建立

和普通内标法曲线法的建立过程一样，先进样标准目标物和其同位素化合物，得到它们的保留时间，定量及特征离子等信息。也可以参考相关标准资料了解目标化合物和其同位素内标的定量或特征离子的相关信息。

下面是20ppm DMS水溶液（可能有点小，大点或许更好测）顶空测定的TIC和质谱图：

从上面看到 H3C-S-CH3(DMS)基峰是62 （分子峰），其它较大的离子有47, 45等。

（二甲基硫醚的α-裂解失去H，m/z61; 重要碎片是CH2=SH，m/z 47；CH2=S, m/z 46; CH≡S，m/z45）

下面是20ppm d6-DMS水溶液的TIC和质谱图：

从上面看到d-DMS(D3C-S-CD3)基峰是68（比DMS多6个amu），其它较大的离子有50, 46等。

六氘代二甲基硫醚的α-裂解失去D（D是2amu， H是1amu），m/z66; 重要碎片是CD2=SD，m/z 50；CD2=S, m/z 48; CD≡S，m/z46

本示例SIM中DMS选用62和47离子；d-DMS选用68和50离子进行扫描检测。大家可以根据自己的需要选择更多的离子来检测。扫描时间：2 – 10min或更长。如下图示例。

配制20, 100, 500, 1000ppm的DMS和100ppm内标d-DMS的系列混合溶液，进样得到质谱数据。这里的系列仅作为示例（当然也是实际数据），您可以根据自己的需要来建立合适的曲线范围。

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2013/8/29 22:23:46 Last edit by jimzhu

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2013/8/29 22:15:25 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

调用其中某一数据文件，先把default.m改为（另存）为其它名称，例如dms.m或别的名称。

点击OK

积分并点击峰得到质谱图。

Calibrate----Set up Quantitation…（不能AutoQuant Setup，因为目标化合物和其同位素内标物的保留时间一样，自动校正曲线建立无法进行）。

在calibrate title里面输入名称，例如DMS test。如果使用RTE积分，就在Use RTEINT前面打钩。如果使用ChemStation积分器，就去掉use RTEINT前面的√。这里用ChemStation积分器为例子，您可以根据个人的喜好选择自己常用的积分器。点Browse，选择events.e积分文件打开。

并输入浓度单位和内标量（根据实际量，后面内标量也是可以改的）。

Edit Compounds （编辑化合物）

点In sert Above, 放大色谱图，积分。先输入内标物的名称或代号，例如IS或d-DMS，在内标ISTD前面打勾。必须是先输入内标物，切记。

左右双键同时点击68离子及50离子，save

在色谱峰（与刚才内标物的位置稍微不同一点位置）上面点击，再输入DMS名称，左右双键同时点击62和47离子，和内标物的方法相同。

Save （可以看到色谱图什么有两个加号）, Exit

Exit

File has been quan titated. Quan titate now? 点击Y。

输入compouds Concentration （化合物浓度）, New Level ID（新级别号）里面输入级别号，例如20或其它代号。

Do up date （更新）

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2013/8/29 23:29:25 Last edit by jimzhu

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2013/8/29 22:15:44 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

确定

点OK，Cur rent chan ges will be saved, Pro ceed? 确定。

用下面方法添加别的浓度，即先调用数据文件，积分，calibrate----up date （图中1）

Up date one level（图中2）----OK----Y（图中3）----Do up date （图中4）, 下面和第一个的建立过程一样。其它浓度的点也是一样来加入更新。最后就可以得到下面的校正曲线了。

记住，方法必须再保持一次后退出，否则化合物列表可能会丢失。

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2013/8/29 23:37:20 Last edit by jimzhu

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2013/8/29 22:16:08 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3 另外说一下多离子加和定量，比较简单（曾请教过别的网友），就是在Advanced菜单下面Q1，Q2, Q3前面选√。例如如果是选两个离子，就在Q1前面选√即可。

当然大家一般是选用单离子定量，这里只是一个示例而已，大家可以根据自己的需要确定选择一个或几个离子共同来定量。

4 样品测定

在同样条件下测定条件下测定样品。选则未知样的MS数据，先需要在Edit Compounds（编辑化合物）里面的identifacatin菜单的sample ISTD concentrating（样品内标加入量）中输入实际内标加入量。用Quantitate/Calculate即可得到含量报告。（比较简单，就不多罗嗦了）

Compound R.T. QIon Response Conc Units Dev(Min)

--------------------------------------------------------------------------

Internal Standards

1) d-DMS 2.368 68 21514996+ 98.40 ppm 0.00

Target Compounds Qvalue

2) DMS 2.378 62 126716352+ 670.49 ppm 89

--------------------------------------------------------------------------

(#) = qualifier out of range (m) = manual integration (+) = signals summed

注：这里的加号（+）是多离子加和的峰面积，不是手动的积分面积。

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2013/8/29 23:39:37 Last edit by jimzhu