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液相色谱（LC）

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主题：【第八届原创】流动相的行踪有多少隐患在其中

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一片枫叶

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发表于：2015/07/16 09:10:46 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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维权声明：本文为v2960432原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

7月二等奖

流动相的居房

流动相一个娇气的纯洁流体，它是有超声脱气的水和纯净的溶剂（甲醇或乙腈）组成，有着流水一般温柔多变的身段，心地纯洁而且自重，宽容能力强，但不善于改变容纳对象。不过也有自己的小错点，娇嫩的身段也经常受到空气的侵蚀，有时受到细菌的感染，为了保持稳重不变的心和洁净的身段，平时要经过严格的脱气和超声训练。
自己有时待在小房子里也会犯些小毛病，在自然条件尤其是适宜的光照条件下，总是耐不住寂寞，就会和身边的小伙伴手拉手搞起小团体，小团体还会慢慢壮大，直到能被人发现，房子里会出现一些絮状物沉淀，为了防止此类现象的出现，避免阳光直射，居住的小房子要求居然是茶色玻璃的，

居住条件虽然那么优越，不过磷酸盐小伙伴来了，就容易发生感染，细菌就像如虎添翼，更加肆无忌惮。这时自己的小房间就会受污染，若不做处理就会严重影响自己。
有的小朋友做的就比较好，为了防止它的感染，禁止灰尘进入小房间，创造了种种发明，他们在房顶钻几个小孔，进气的小孔用滤头堵封，既能进气又能防尘，效果妙极了。有的用了安全帽，也有同样的效果。

流动相对自己的要求也很严格，超声脱气当然是必选，微膜过滤也要经过这一关，脱掉有害的气体，滤掉有害的颗粒，最后还要通过滤头的检验——滤头的孔径是0.45um，材质分为玻璃烧结石英和不锈钢的，如果这个东西脏了的话，就会造成吸液不畅，不过可以进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸侵泡过夜，不锈钢材质的可以直接超声清洗。

脱气机中的流动相

通过滤头检验的流动相自然是经过预先脱气的，这样能大幅度减少脱气机的工作负担，因为脱气机的脱气效率是一定的，如果自身溶解的气体超过了脱气机能处理的最大值(尤其是在高流速的情况下)，气体就除不干净了，那时候就可能在混合的时候，形成气泡影响仪器压力出现波动和噪音了。
流动相耐动不耐静，如果长时间呆在在脱气机里，携带的微生物，细菌藻类很可能继续繁殖，脱气机管道里就布满了水藻而堵住，亦或乙腈还会聚合，因此，长时间不用的脱气机一定把水相替换成甲醇，防止长藻和乙腈聚合。
堵和漏是一对欢喜冤家，液相色谱上能堵的地方，也都有可能漏，脱气机也不例外，通常漏液有两种可能，一种是接头松动，只要重新拧紧即可，另外一种情况就比较倒霉了，真空腔损坏，这个就要大修了，造成这种灾难的通常都是，流动相的速度超过了脱气机能耐受的最大流速造成的。
流动相从脱气机出来就到了高压泵，

很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动就是最常见的一类问题，泵正常的压力波动通常会在2%以内，切平稳规律，不正常的波动通常由于气泡和盐造成：如果流动相中的气泡没有被脱气机除掉而到了泵以后，那么就会造成压力波动，通常我们可以通过重新purge流路和再次脱气流动相解决。由盐造成的波动主要是因为流动相中加入了浓度较高的缓冲盐，在含盐流动相与有机相混合的时候，盐会有微小的析出，从而导致压力异常波动，解决这类问题可以考虑适当的降低盐浓度，或者使用甲醇取代乙腈有机相。如果由于种种原因一定要用到这种流动相，可以考虑在有机相中加入一定比例的水，然后适当提高梯度结束的终点。
在泵的维护里还有一个经常会做的工作就是更换purge阀上的过滤白头，其实难点不在更换这个白头本身上，而是在于判断什么时候该换，通常判断的标准是纯水5mL/min流速purge的时候，如果压力超过10bar，要考虑更换。更换下来的白头，也可以大概判断仪器的使用状况：如果白头是白色的，好像不脏，但就是堵，那有可能是流动相中的盐有析出造成的；这台仪器长期忍受着高盐流动相，如果换下来的是灰黑色的，这是最常见的状况，这是由于泵头密封垫的磨损造成的；如果出现频繁更换白头切更换下来的都是灰黑色的话，提示仪器密封垫的磨损过快，可能要考虑升级柱塞杆清洗的设备；如果这个白头换下来的颜色是黄色，绿色等怪异的颜色，那么，仪器该讲讲卫生了，这是流动相里的微生物造成的。
在泵的使用过程中，有时会遇到替换流动相的情况，这种替换是指从反相溶剂替换到正相溶剂或者反过来替换的过程，这个过程最重要的就是流动相的兼容性，常用的正反相色谱溶剂是不互溶的，所以在替换中间，一定要用异丙醇彻底冲洗系统，保证管路里所有的原有溶剂都被异丙醇替换掉。

流动相继续往前走，就到了进样器，进样器分手动和自动两大类。

自动进样器最常见的问题就是脏，用专业说法叫交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内/外表面，并随在下一次进样进入色谱系统，要解决交叉污染，也很简单，就是洗，自动进样器都会有洗针的功能，如果样品浓度较高或者是吸附性比较强的样品，一定要打开此功能，由于仪器设计的原理，安捷伦的自动进样器无需清洗进样针内壁；手动进样器的话，要注意手动清洗针的内外表面。如果忘记打开洗针功能，污染可能已经残留在了针座或六通阀阀上，这个时候要最这两个部件清洗，需要按照仪器说明书上的维护步骤拆下这两个部件进行超声清洗。
出现在自动进样器上的另外一个问题是峰面积重现性问题。通常这是因为自动进样器吸样品的时候出现了问题，首先观察样品的液面是不是足够高，以保证进样器可以吸到；如果排除了这个问题，就要看看自动进样器的设置了，对于一些粘度大的样品，要降低自动进样器的吸取速度，这个可以在仪器设置中改变；当然，还有一些更罕见的问题：样品吸附在了样品瓶上，这个时候可以考虑换一中材质的样品瓶；还有一类情况，是由于样品瓶的瓶盖拧的太紧，导致瓶内与空气隔绝，使得吸样不准确，这个时候可以考虑适当的把瓶盖拧松一点。
流动相一路波折，进入柱温箱，

柱温箱会有两个控温区，左边的区域上写着3uL，右边写着6uL，表示这两个温区内的体积不一样，通常，我们要使用3uL的那个，以减小仪器的延迟和扩散。
流动相过五关斩六将，下一站就是检测器。

检测器里有个非常重要的部件是光源，俗称灯，灯是一个消耗品，就像家里的灯泡一样，用到一定程度就坏了。但是检测器里的灯不能家里的电灯泡一样点不亮了再换，因为放在检测器里的灯是对发射能量有要求的，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪音变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题。通常，灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”来判断，测试的结果会分别评估低中高三个波长段的能量，一旦某个波长段的结果显示失败，就表示要换灯了，通常首先出现失败的都是低波长段。

检测器里另外的一个重要部件是检测池，也叫流通池。很多时候，大家最关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦堵掉，很可能造成损坏。不过还好，检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐的流动相残留在了检测池里导致盐析出，或者是乙腈聚合在检测池里，要不就是有些童鞋不太小心，不小心压住了废液管线。
关于检测池，有时候还会遇到一个小问题，就是检测池里的气泡，气泡是哪儿来的，可能是流动相中溶解的气体，也可能是仪器长时间不使用检测池干了导致的，体现在仪器的表现上，就是基线噪音某明其妙的变大，出现毛刺等等，这个时候，可以先观察系统压力；如果压力平稳正常，可以判断这个波动应该不是由于泵造成的，那肯定就是由于检测池里的气泡造成的了，对付这个气泡，没有太好的办法，只能用纯甲醇慢慢冲，不过倒是有个小办法可以防止，就是在检测器的出口出用一小段细内径的PEEK管使其产生一点背压，可以很大程度的预防气泡的产生，但是注意千万不要太长。

流动相一路行程，最后进入废液瓶，完成了自己的承载任务，也将寿终正寝，了却一生。

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2015/7/16 13:31:26 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相的行踪解析呀

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2015/7/17 8:06:45 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 又又1990(v2984502) 发表:
流动相的行踪解析呀

体现流动相的特点，性质，使用中存在的一般问题：
流动相具有稳定性。
流动相不与样品发生反应。
流动相容易与空气中的氧发生反应而变质。
流动相容易被细菌感染。
含有缓冲盐的流动相性质更容易发生变化。
乙腈流动相容易聚合成小团体。
使用注意事项及存在的问题：
使用前必须超声脱气，过滤——气泡及污染物使系统压力波动。
含缓冲盐的流动相盐容易析出堵塞污染管路及系统——造成压力波动。
含缓冲盐的流动相长时间在脱气机中会对脱气机造成污染，影响脱气机正常工作。
对高压泵过滤白头污染的判断及处理措施。
样品对进样器的交叉污染。
检测器能量的判断。
流动相气泡及缓冲盐对检测器的影响及处理措施。

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2015/7/17 8:46:22 Last edit by v2960432