主题：【第八届原创】原子吸收分光光度法测定人凝血因子VIII中铝离子残留量

    人凝血因子VIII辅料中加入Al₂O₃作为吸附剂，因此其在制剂中需对其残留量进行检测。由于其制剂成分复杂、有机物干扰严重、某些样品中的铝含量极低, 有些分析方法检出限达不到要求。石墨炉原子吸收光谱法是铝残留量分析中常用的方法之一。

      本文采用非离子表面活性剂Triton X-100,基体改进剂硝酸镁 ，建立了石墨炉原子吸收分光光度法检测人凝血因子VIII中铝离子残留量的分析方法。

1 　实验部分

1 .1 　仪器与试剂

ICE 3400GF 型原子吸收光谱仪(美国Thermo公司):ID100 自动稀释器,Chill I冷却水系统，GFS35Z石墨炉，自参比单光束塞曼系统, GFS 石墨炉自动进样器, 涂层石墨管（Extended Lifetime Cuvettes）；铝空心阴极灯；ELGA Q15 纯水机。

HNO₃为MOS级；100μg/mL铝元素标准溶液（GSB 04-1713-2004) , 标准工作溶液均由以上溶液经超纯水逐级稀释而成的；稀释液：1%（v/v）硝酸+0.01%（v/v）Triton X-100(化学纯试剂)；2.5g/L Mg(NO₃)₂ 基体改进剂:称取0.25g分析纯Mg(NO₃)₂到PPE塑料烧杯中, 用超纯水溶解定容至100mL PPE塑料容量瓶中。实验所用水为电阻率为18.2 MΩ·cm 的超纯水。

1 .2 　样品预处理

1.2.1 供试品溶液  精密量取供试品溶液0.2ml，加稀释液2.3ml。

1.2.2 混合溶液  精密量取供试品溶液0.2ml，加入100μg/L标准铝溶液0.50ml，再加稀释液1.8ml。

1 .3 　实验方法

准确移取稀释液、供试品溶液、混合溶液倒入自动进样器的样品杯中, 再通过自动进样器进样后由石墨炉原子吸收光谱仪进行铝含量的测定。

1 .4 　仪器工作条件

石墨炉原子吸收光谱仪测定铝时的工作参数设置和石墨炉升温程序见表1 和表2 。

表1 石墨炉原子吸收光谱仪的操作参数

Tab.1 Operating parameters for GFAAS

表2  石墨炉升温程序

Tab.2  Graphite furnace heating program

1 .5 　工作曲线的制作

将0，5，10，20，30，40 ng/ mL 的Al 标准溶液分别倒入自动进样器的样品杯中, 再放置到样品盘上, 由自动进样器自动添加基体改进剂, 在表1 所列的仪器工作条件下由低浓度到高浓度测定吸光度, 仪器将自动绘制工作曲线。

2 　结果与讨论

2 .1 　灰化温度和原子化温度的选择

以供试品溶液进行试验, 得到样品的灰化曲线及原子化曲线。从试验结果可以看出,随着灰化温度的不断提高, 样品基体干扰逐渐减少, 当灰化温度升到1500 ℃时, 测得的吸光度较高且变化不大, 继续升高灰化温度到1600 ℃铝开始损失, 本文选用的灰化温度为1500 ℃。原子化温度由2400 ℃开始, 吸光度斜线上升至2500 ℃,吸光度开始缓慢上升, 考虑到温度升高会导致石墨管的寿命缩短, 所以原子化温度选择为2600 ℃。

                                    表3 灰化温度 

                                                            表4 原子化温度

2 .2 　干燥温度和斜坡速度的选择

以20ng/ mL标准溶液为待测溶液, 考察了干燥温度对实验的影响。试验中发现干燥温度升至80℃以上时，可观察到鼓泡、喷溅现象，导致原子化时的样本量减少，影响检测结果，增加80℃的干燥可有效减少上述现象的发生；在110℃和220℃的干燥过程中，分别增加3℃/s和1℃/s的斜坡速度可改善实验结果的重复性。

2 .3 　基体改进剂的选择

在石墨炉原子吸收光谱分析中，为了减少或消除基体组分的背景干扰，常采用基体改进剂技术。本文选择2.5g/L Mg(NO₃)₂ 基体改进剂，在进样程序中分别“湿加”1，2，3，4，5µL基体改进剂进行试验，发现3µL时，吸光度最为理想，故本文选择在进样程序中“湿加”3µL基体改进剂。

2 .4 　Triton X-100 浓度的影响

为了提高富集能力, Triton X-100浓度的大小决定了表面活性剂相体积的大小, 试验中固定吸取同等体积 的Triton X-100，通过改变Triton X-100 的浓度, 研究了不同浓度的Triton X-100 对实验结果的影响。通过试验发现:当TritonX-100 的浓度太低时, 供试品溶液喷溅现象严重，实验结果重复性差；当浓度达到0.01%（v/v） 时, 吸光度达到最大值；浓度增加到0.02%（v/v），供试品溶液会发生凝固现象。因此试验选择加入0.01%（v/v）的Triton X-100溶液来进行试验。

2 .5 　气体流量的影响

在气体流量的选择中，试验发现灰化和原子化时，气体流量为分别为1 l/min和0 l/min时，吸光度值最大，重复性明显改善。

2 .6 　分析特性

按实验方法进行测定, 标准曲线相关系数r =0.999, 线性范围为2 ～ 40 ng/mL ;对空白溶液重复测定12次, 以3倍标准偏差除以工作曲线的斜率, 检测限为0.8 ng/mL。对某一个样品平行测定6次, 其相对标准偏差为5.6 %。

2 .8 　加标回收试验

本文对样品溶液进行了加标回收率的测定,测得的样品回收率为94.5%～103.5 %, 可以看出本法具有很好的回收率, 方法可靠。

2 .9 　样品测定

按照本文所述的方法, 对6 批人凝血因子VIII样品中的铝进行了测定, 试验发现待测样品中的铝质量浓度分布在10.4 ～ 61.3 ng/mL之间。

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