刚开始用的溶剂是乙腈，体系为TFA乙腈体系，无法得到理想的峰形，而且尝试了很多种都不可以，后来尝试可一个梯度，这个梯度下出峰尖锐，但是并不理想，有峰未分离开来。
(这个梯度是尝试了很多种后选择的分离度相对较好的条件。)
梯度：0 50% 50%
5 50% 50%
9 15 % 85%
17 15% 85%
19 5% 95%
27 5% 95%
27.01 50% 50%
后来尝试往有机相加了一定比例的甲醇，约30%(尝试过15-45%)基本差不多。
乙腈溶解，0.1%TFA和30%+70%乙腈做流动相，梯度跟上图一样，出了两个峰，但实验员反映，打过核磁没有发现同分异构体也没有其余杂质。
如下图

后来怀疑会跟流动相中的甲醇反应，于是将溶剂换成了甲醇，梯度流动相与上图一致，发现峰变成了一个，全部转化为左边峰，证明产品会与甲醇反应。
（也试过异丙醇，一样会反应）
如下图。

因此这个体系不可取了，实验员认为TFA可能也会与化合物反应，并且猜测化合物为中性，让用纯水，但是在我看来中性化合物的话，PH的影响对其在液相中的保留时间分离度不会有明显变化，但是还是尝试了一下纯水体系。
乙腈溶解，纯水和乙腈作为流动相，梯度与上面相同，保留时间延后，分离度变好。但是左边依然有一个峰，这与最开始TFA和乙腈体系下有点相似，左边有一个未分离开来的小峰，在这个体系下分开了。那么说明这个化合物并非是中性化合物吗？
如下图

为了证明左边的峰是否是与甲醇反应的峰一致，于是又进了一针甲醇溶解的，梯度进样量与上相同。结果变成了三个峰，第三个峰变小了，中间的峰变高，并且多了第一个峰……

就以上几种尝试多了很多无法想通的问题：
1、这个化合物到底是偏中性还是碱性。
2、在TFA体系下，甲醇溶解后进样只出一个峰，而在纯水体系下，却出了三个峰，那么是否说明起始在TFA的体系下也有三个峰，只是未能完全分开。
3、谁做过类似的化合物，是否有较好的分析方法呢？
最新的情况：
还有一个化合物跟上面的相似，是其前一个步骤称为化合物1，只有一个基团不同，就是右下角是羟基，其余一样，上面那个就称为化合物2
然后我们用上面的方法，TFA体系和纯水体系，有机相都为乙腈的条件下走了两针。
在TFA体系下峰形良好，出峰时间约18.7，在中性体系下，峰形宽胖，出峰时间15.0min。
然后呢还得知了其PKA值为6.7左右，上面那个化合物2PKA值5.3左右。
那么为了更好的分离这两个物质，我选择的流动相应该PH在多少？
已知TFA/磷酸这种较弱的PH下不可以分离，两个化合物峰靠的很近。
在纯水体系下，两个化合物分离的很远，带羟基的化合物1出峰时间15.0min，但是峰形宽胖，带醛基的化合物2出峰时间27min，分离度良好，但是时间太靠后，试了好多其他梯度都没办法解决。
我准备尝试0.1%的氨水体系，不知道是否可以。
有没有其他更好的调节方式呢？望指教~~~