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流动相混合方式对苦参碱及氧化苦参碱出峰影响
1. 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱Agilent ZORBAX NH
2(Agilent ZORBAX SB C18);以乙腈-异丙醇- 3 % 磷酸溶液(80 :5 : 15)为流动相 ;检测波长为210nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于4000。
2. 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品 适量,精密称定,加流动相分别制 成苦参碱94.74 μg/ml, 氧化苦参碱156.65μg/ml的混合溶液,即得。
3. 供试品溶液制备 取本品粉末(过三号筛)约0. 3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液0. 5ml,精密加入三氯甲 烷20ml,密塞,称定重量,超声处理 (功率250W,频率33k Hz)30分钟,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,加在中性氧化铝柱 (100〜200目,5g,内径 1 cm )上 ,依次以三氯甲烷、三氯甲烷 -甲醇(7 : 3)混合溶液各20ml洗脱,合并收集洗脱液,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转移至10ml量 瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得。
4. 样品分析 依次将混合对照品溶液和供试品溶液进样10 μL,记录苦参碱、氧化苦参碱保留时间及峰面积。
5. 结果5.1 以乙腈(A)-异丙醇(B)- 3 % 磷酸溶液(C)三相流动相泵前混合
混合对照品溶液及供试品溶液色谱图分别见图1、图2.
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图1 对照品溶液色谱图
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图2 供试品溶液色谱图
5.2 以乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液(80:5:15)混合溶液为流动相
分别将乙腈、异丙醇、3%磷酸溶液过膜,之后将乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液按照药典比例混合均匀于同一流动相瓶中,超声脱气,在线脱气。混合对照品溶液及供试品溶液色谱图见图3、图4。
图3对照品溶液色谱图
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图4 供试品溶液色谱图
6 讨论 以乙腈(A)-异丙醇(B)- 3 %磷酸溶液(C)三相流动相在四元泵上泵前混合,或者以乙腈为流动相A、异丙醇-3%磷酸溶液(5:15)为流动相B二元高压泵上泵后混合,对照品溶液和供试品溶液苦参碱、氧化苦参碱出峰异常,见图1、图2。只有预先将乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液按照药典(80:5:15)比例预先混合均匀,脱气,对供试品溶液及对照品溶液梯度洗脱,苦参碱和氧化苦参碱出峰正常,见图3、图4。