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液相色谱（LC）
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主题：【分享】【实战宝典】做核酸纯化分离时对液相色谱有什么要求？

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发表于：2021/03/23 11:14:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
解答：（1）化学合成的肽产品是一个纯度不好的粗产品，其一是因为在合成肽过程中各种副反应、消旋化等造成的副反应肽；二是在脱保护过程中，由于保护基的残留，肽键的断裂、烷基化等造成的杂质。由于杂质与合成的肽在分子结构和化学性质上非常相似，给肽的分离纯化带来了困难，需要根据对目的肽的要求选择适当的方法进行纯化。

（2）目前用于分离纯化合成多肽的液相色谱模式主要有三种：一是凝胶过滤色谱，按照肽分子的大小进行分离；二是离子交换色谱，按肽分子所具有的带电基团的性质和数目进行分离；三是反相色谱，按照肽分子的疏水性强弱进行分离。

（3）通常采用制备或者半制备色谱对合成多肽化合物进行分离纯化。制备色谱的进样品量很大，因此要求进样系统能满足大体积进样要求，例如计量泵、定量环的体积会不同于普通分析型色谱。进样量的增加导致制备色谱柱子的分离负荷相应加大，也就必须加大色谱柱填料，增大制备色谱的直径和长度。如GB/T 20770-2008《粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中使用的色谱柱要求柱长400mm，内径25mm。要将待分离组分从如此规格的色谱柱中洗脱下来，就需要使用相对多的流动相，因此制备色谱的管路也比分析色谱粗很大，同时泵的流速也较高，通常需要设置为5mL/min。由于制备或者半制备色谱仅用于分离纯化，不用于定量或定性分析，对泵的精密度、检测器的灵敏度等要求较低。

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