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液相色谱（LC）
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主题：【求助】经过色谱柱后荧光信号大大降低，为什么？

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linlin6
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发表于：2012/05/25 18:10:46 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
使用荧光检测器时，样品不接色谱柱，直接进样到检测器，信号很强。
所有条件没变，接上色谱柱后再次进样，信号极度减弱，只有原来的1/10，百思不得其解。
特向各位请教
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2012/5/25 19:29:20 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
溶液稳定吗？
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有水有渝
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2012/5/25 22:01:03 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不接色谱柱可能是所有信号集中出现，过了色谱柱就是分开了，不然就是色谱柱吸附，方法是成熟的标准方法吗？
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linlin6
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2012/5/26 10:34:10 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
溶液是磷酸盐缓冲液和乙腈，应该很稳定
方法也是老方法了，2年前还做过，当时灵敏度够，也就没拆柱子试验，不知道当时是不是也有这种情况。
但现在灵敏度不达标了，也不知道该咋办。
色谱柱的填料会造成荧光淬灭吗？查了好多文献，没发现有这种提法的。
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有水有渝
xky0230699
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2012/5/26 11:42:37 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把以前的图谱调出来看一下就知道了，同时检查一下灯的能量值，最好能做一个荧光扫描。
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sjzhang156
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2012/5/26 16:34:11 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先楼主不是衍生的吧？如果是衍生的一般试剂实际过量，经过色谱柱分离后过量的衍生实试剂分来了，所以峰就小了。如果楼主不是衍生的，那么经过色谱柱和没经过色谱的液相条件是不一样的（有机相的比例变了），荧光强度与溶剂也有关系奥，刚走了个样，改变梯度提前2分钟，灵敏度就下降一半。
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2012/5/28 23:12:17 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sjzhang156(sjzhang156) 发表:
首先楼主不是衍生的吧？如果是衍生的一般试剂实际过量，经过色谱柱分离后过量的衍生实试剂分来了，所以峰就小了。如果楼主不是衍生的，那么经过色谱柱和没经过色谱的液相条件是不一样的（有机相的比例变了），荧光强度与溶剂也有关系奥，刚走了个样，改变梯度提前2分钟，灵敏度就下降一半。


或许荧光强度与流动相的比例有关系，我再试试看，多谢了
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linlin6
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2012/5/30 21:18:38 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还是不知道什么原因，因任务时间紧迫，暂时先放一边了，等有空再来琢磨，多谢各位
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