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主题：【第十四届原创】细胞培养及形态学观察

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小矮马
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小矮马发表于：2021/10/10 23:35:25 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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细胞培养及形态学观察



（1） 细胞复苏：从液氮中取出细胞后，将细胞冻存管用细胞复苏盒迅速转移至37℃恒温水浴锅中，轻摇使细胞迅速解冻。细胞解冻后立即吸取至10 mL预热的完全培养基中，吹打混匀，900 rpm 离心8min。吸弃上清，用5 mL完全培养基重悬细胞，将细胞接种至25 cm2培养瓶中，沿培养瓶瓶底吹打，使细胞附着在培养瓶瓶底，恒温37℃，5% CO2条件下培养。

（2）细胞传代：H446为半贴壁半悬浮细胞，DMS114为贴壁细胞，H69、H526为悬浮细胞。吸弃培养基后用5 mL 1×PBS清洗2次，吸弃上清，每25 cm2培养瓶或6 cm培养皿加入1 mL胰酶消化2 min。镜下观察细胞变圆形或轻拍开始脱落，加入2 mL完全培养基终止消化（悬浮细胞不需胰酶消化），移入15 mL离心管内，900 rpm，离心8 min。吸弃上清液，加入新鲜培养基重悬细胞并吹打混匀。将细胞按实验需求接种于培养瓶或培养皿中，培养条件同上。

（3）细胞计数：制备细胞悬液（实验步骤同细胞传代），吹打混匀，取200 μL的细胞悬液至1.5 mL EP管内，再加入200 μL的台盼蓝染色剂，充分吹打混匀细胞悬液。取适量细胞悬液滴加于细胞计数板上，在显微镜下观察并计数（被台盼蓝染成蓝色的细胞为死细胞，死细胞不计数），分别计数视野中计数板上四个大格子中细胞的数量，并计算平均值。细胞密度=平均值×104，即每毫升培养基中细胞的数量。

（4） 细胞冻存：将处于对数生长期的细胞制备成细胞悬液（步骤同上）并计数。每0.8-1.0×106个细胞加入1 mL细胞冻存液，轻轻吹打混匀，每支冻存管加1 mL的细胞悬液（标记清楚冻存细胞代数，所用培养基，细胞来源，冻存日期，冻存者姓名缩写）。将冻存管用封口胶封好后放入细胞冻存盒（含异丙醇）中，放入-80℃冰箱保存，第二天将细胞移至液氮罐中以长期保存。

细胞形态学观察

（1）铺板 取对数生长期 H446、H69、H526、DMS114细胞，计数，分别接种等量细胞至6孔板，“十字形”晃动，使细胞分布均匀，继续培养。

（2）药物处理 待细胞融合率约80%，加入不同浓度（0、IC20、IC50）含药培养基。每组均设置DMSO对照组。

（3）放入培养箱培养48、72 h后观察细胞形态并拍照。
附件：
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2022/1/16 14:29:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
进来学习一下看看效果如何不错不错收获满满评价管理层会议评价管理
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小矮马
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2022/1/17 18:31:27 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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