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主题：【分享】SDS-PAGE电泳的常见问题解析（FAQ）

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lijing320323
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发表于：2021/11/13 22:45:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
目的蛋白质条带模糊
电泳凝胶浓度选择不当。

低于10Kd的小分子蛋白质要用Tricine胶。

靠近前沿的电泳带分辨率不佳。根据分子量与凝胶孔径的关系，选择适当浓度的凝胶。

蛋白质样品水解。注意除去蛋白质样品的内源性的水解酶，不要反复冻融。

电泳时间过长或过短。溴酚蓝达到分离胶的底部即应该关闭电泳电源。

缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。

避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。

加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。
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