对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品12.75mg,置于50mL量瓶中,加80%乙醇超声溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为255.0 mg/mL的芦丁对照品贮备溶液。精密吸取2.5mL芦丁对照品贮备溶液,置于50mL量瓶中,加80%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得浓度为12.75 mg/mL的芦丁对照品溶液。
供试品溶液的制备
取贯叶金丝桃药材,粉碎,过三号筛。精密称取贯叶金丝桃药材粉末25mg,置于10mL量瓶中,加80%乙醇适量(5mL),超声提取1h,放冷,80%乙醇稀释至刻度,摇匀,0.45 mm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得药材供试品溶液。
称取贯叶连翘提取物粉末5mg于10mL量瓶中,加80%乙醇适量(5mL),超声溶解,用80%乙醇稀释至刻线,摇匀,静置。0.45 mm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得提取物供试品溶液。
对黄酮类物质的含量测定多采用紫外-可见分光光度法,常用芦丁为对照品,经NaNO2- A1(NO) 3-NaOH显色后用比色法测定,也有用AlCl3-醋酸缓冲液(pH4.5)显色测定的。本研究分别从方法的稳定性、准确性方面比较了两种测定方法,结果显示亚硝酸钠法测定值偏高,考虑到贯叶金丝桃药材中含有鞣质、绿原酸、咖啡酸等具有邻二酚羟基结构的非黄酮类成分物质,会发生假阳性反应,因此选择三氯化铝显色法。
分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各1.5 mL,置于10mL量瓶中,各精密加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0mL,使混匀,再分别加入80%乙醇稀释至刻度,摇匀,室温放置20min,以试剂为空白,按紫外-可见分光光度法规定进行检查,在410nm波长处测定吸收度,以标准曲线法计算,即得。
4 含量测定
制备含量测定药材供试品溶液。按含量测定方法项下操作,在410 nm波长处测定吸收度值,采用标准曲线法按质量百分比计算样品中黄酮类成分的含量,结果见表1。
由表1可知,10批不同产地的贯叶金丝桃药材中黄酮类成分的含量测定结果范围为2.91%~4.17 %。
Tab. 1Contents of flavonoids in Hypericumperforatum fromdifferent sources
No. | Sources | Contents(%) |
S1 | Sichuan | 3.33 |
S2 | Sichuan | 2.98 |
S3 | Gansu | 3.2 |
S4 | Gansu | 3.47 |
S5 | Jiangsu | 2.91 |
S6 | Jiangsu | 3.54 |
S7 | Jiangsu | 3.42 |
S8 | Jiangsu | 3.01 |
S9 | Shanxi | 2.95 |
S10 | Shanxi | 4.17 |