主题：【第十五届原创】荧光素钠原料药中残留溶剂二氯甲烷的测定

浏览0 回复1 电梯直达

锦锦添花

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2022/09/01 14:14:07 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为Insp_a23526e5原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

荧光素钠为橙红色粉末，无臭，几乎无味；有引湿性，在水中易溶在乙醇中略溶，是一种化合物染料,具有荧光特性。其分子式为(C₂₀H₁₀O₅Na₂),相对分子质量为376.27，在pH为8时荧光最强。熔点328 ℃。其荧光素钠结构见Fig.1。

Fig.1 the Structure of sodiumfluorescein

本品为诊断用药，是一种染料，对正常角膜等上皮不能染色，但能对损伤的角膜上皮染成绿色，从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。本品流经小血管时，能在紫外线或蓝色光激发下透过较薄的血管壁和黏膜呈现绿色荧光，从而显示小血管行经和形态等，据此可供眼底血管造影和循环时间测定。

荧光素钠原料药在工艺中使用了二氯甲烷，采用气相色谱法对其进行了测定。

1 残留溶剂二氯甲烷的气相色谱测定

色谱柱：DB-WAX毛细管柱（30.0 m×0.25 mm×0.25 μm）(Agilent科技有限公司)

升温程序：60 ℃，保持3 min，以100 ℃·min^-1的速率升温至200 ℃，保持1 min。

流速：1.0 mL·min^-1

进样口温度：230 ℃

检测器温度：250 ℃

载气流速为1.0 mL·min^-1

分流比为10：1

进样量：1 μL

取对照品溶液，在上述色谱条件下测定。二氯甲烷理论塔板数为87819，色谱峰与内标峰分离度大于1.5，拖尾因子符合要求。

溶液配制

内标溶液的配制：取正丙醇适量，精密称定，置于50 mL量瓶中，以重蒸水稀释并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.539mg·mL^-1的内标溶液。

对照品溶液的配制：取二氯甲烷适量，精密称定，置于100mL量瓶中，以重蒸水稀释并定容至刻度，摇匀。精密量取1.25 mL，置于10 mL量瓶中，以重蒸水稀释并定容至刻度，

摇匀，得浓度为305μg·mL^-1对照品溶液。

供试品溶液的配制：称取荧光素钠原料药适量，精密称定，置于10 mL量瓶中；精密量取内标溶液0.2 mL，以重蒸水稀释并定容至刻度，摇匀，得到浓度约为0.2g·mL ^-1的供试品溶液。

专属性考察

分别取水，对照品溶液及供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，结果表明水及内标对二氯甲烷的测定无干扰，方法专属性良好。标准品及供试品色谱图见Fig.2~ Fig.3。

1—Dichlormethane; 2—N-propanol

Fig.2GC chromatogram of standards

2—N-propanol

Fig.3GC chromatogram of sample

检测限和定量限

取对照品溶液，逐级稀释至对照品色谱峰峰高分别达到3倍和10倍信噪比。得到二氯甲烷的检测限和定量限分别为10.2 ng和30.5 ng。

线性关系考察

精密量取对照品溶液1、2、4、5、7、9 mL分别置于10 mL量瓶中，精密加入内标溶液

0.2mL，以重蒸水稀释并定容至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样分析。以对照品的质量浓度(C , μg·mL^-1)为横坐标，二氯甲烷峰面积与内标峰面积的比值（A）为纵坐标，线性回归方程为：

A = 8.618 6C -0.021 6，r =0.994 5

结果表明二氯甲烷在30.5 μg·mL^-1~ 274.5 μg·mL^-1内与峰面积呈良好线性关系。

仪器精密度试验

取同一对照品溶液在上述色谱条件下，重复进样5次，计算二氯甲烷峰面积与内标比值的RSD为2.6%，结果表明仪器精密度良好。

加样回收率试验

分别精密称取荧光素钠9份，每份约2.0 g于10 mL量瓶中。分别精密加入对照品溶液4、5、6 mL，各加入内标溶液0.2mL，按“溶液制备”项制备低、中、高3个质量浓度的供试品溶液。在上述色谱条件下进样分析。测到二氯甲烷平均回收率为102.4%，RSD为3.4%。

样品测定

取荧光素钠原料药约2 g，精密称定，按“溶液制备”项制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，以内标法计算，二氯甲烷残留量小于10μg·mL^-1。结果见Tab.1。

Tab.1 the Determination results of dichlormethane（n = 5, 标示量 %）

No.

Dichlormethane

ND.