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madong5758
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发表于：2007/10/15 22:32:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的柱子：TSK-GEL SW Type    Steel Column SWXL 7.8x30(cm x cm)样品：0.3g/L蛋白质溶液(检测其中蛋白质是否聚合）
缓冲液：PH6.8的0.2M左右的磷酸盐缓冲液（浓度是否太高？）
清洗液：10%的甲醇水溶液
流速：0.8ml/min
最开始用的时候没加保护柱，压力大约41巴。后来加上保护柱后压力大约46巴，进样大约100次后，今天发现压力突然增大了达到63巴，柱子压力的上限为70巴。
我每次做完实验都用10%甲醇冲柱子半小时，再用水冲半小时。再拆柱子。
我不知道是什么原因造成柱子压力突然增大，求高人指点，怎么才能使柱子压力降下来？用什么洗液冲洗柱子？还有柱子能不能反向冲？
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junyuxinyan
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2007/10/15 22:52:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
具体原因不知道，应该是某个地方堵了，包含那个滤芯。柱子是可以反冲，你应该反冲一下，我曾经作过一次蛋白质检测，不过当初冲柱子好像不是10%甲醇，是纯的甲醇，个人看法，达人赶快出现帮忙解决问题
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Easy-Boy
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2007/10/16 8:37:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你不能将柱子保存在100％的水中，而应当在拆柱子前用80％甲醇冲洗柱子。
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wsy18
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2007/10/16 9:18:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
清洗再生柱子的方法，供参考：
[flash]http://files.instrument.com.cn/bbs/upfile/200718122023.swf[/flash]

点击下部俩小叶片可观看下一页或返回，点击刷新按钮可返回首页。
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xiaomity
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2007/10/16 9:21:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
磷酸盐浓度也就20mmol左右才是可用的.做蛋白不加保护柱会很快被残留蛋白给堵塞.在其他方法都搞不定时,可以用HPLC级THF冲洗30分钟(1ml/min),再用甲醇或乙腈冲洗30分钟,再降速到0.2ml/min分钟冲洗30分钟
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xiaomity
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2007/10/16 9:33:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
上面都是C18柱的清洗,凝胶柱估计得用5%甲醇低流速(0.2ml/min)冲洗过夜.换根保护柱.
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wsy18
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2007/10/16 10:38:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于蛋白质凝胶柱的清洗再生在三楼flash课件的第五节中有介绍，有二种情况，方法是不同的，可以参考。
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Last edit by wsy18
zap_1979
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2007/10/16 13:28:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

你好!
你使用的缓冲溶液盐浓度不算很高,但在你做完之后没有清洗好管路,泵以及柱子等方面.
建议你现在先用低流量,60%水+40%甲醇或者乙腈送开主动阀,把纯水放在你之前放缓冲溶液的瓶子中,冲洗整个管路,看压力,如果压力过高,可能要换主动阀芯之类的东西,如果没问题,冲一段时间后,低流量冲洗柱子,等压力正常之后,再20%左右的异丙醇冲洗管路，可以用剃度洗脱程序变化冲洗,一端时间后可能会正常,再用60%水+40%甲醇或者乙腈冲洗.
估计是你做后没有好好冲洗,谢谢,希望对你有帮助!
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mars_0529
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2007/10/16 13:29:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
什么型号的液相？？
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madong5758
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2007/10/16 16:29:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

哇！这么多的高手，看来来对地方了，谢谢各位老师啊。
昨天采取的措施：
1、我先把色谱仪的滤芯（比较脏了）换了，压力降了大约4巴。
2、用超纯水0.2ml/min反向冲了3个小时，在柱前头冲出来个小米粒大小，塑料材质，灰白色的颗粒，不知道是不是柱子里的东西。
3、我又正接柱子用10%的甲醇0.2ml/min冲了20个小时柱子，现在柱子压力降到46巴，和开始用的时候差不多了。
我还有个问题啊，我用的柱子型号：TSK-GEL SW Type 
                              Steel Cloumn SWXL 7.8x30(cm x cm) 
（说明书丢了）这种型号的柱子可以用纯甲醇冲么？我一般就用10%甲醇冲。保存得用什么溶液保存？
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madong5758
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2007/10/16 16:31:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
安捷伦1100
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