主题：【讨论】关于流动相的问题?

由于流动相纯度对仪器的使用寿命很关键，因此，你所配制的流动相首先应以不伤害色谱柱或伤害极小为前提，要是柱子都给弄坏了，那还能往下做吗？所以，进液之前，流动相一定要脱气．同时，要找到适合你实验所用的流动相以及混合流动相的比例，这对你的实验结果有很大影响．另外，流动相要现配现做，隔天的就不要再用了，因此，配流动相不能配太多，比实验所需的量（包括进样跟洗柱）多大概１／３到１／４就行了．

原文由 zpkitten 发表:
如果从选择开始
1.首先考虑流动相与柱子、检测器的兼容问题，毒性大小、经济因素，另外最重要的是对检测组分的分离、洗脱能力
2.混合流动相之间的比例，有缓冲盐的话考虑如何过渡
3.配制过程中必要的过膜、脱气等
4.选择合适干净的容器

多向你学习。

用的是哪个牌子哪个型号的液相色谱仪啊？

原文由 cuiyanhu 发表:
本人有一个问题,大家都在做液体.对配制流动相是一件很平常的事不过大家有没有去总结一下,要配也一个流动相都在注意些什么东西啊.有很多有认为每种药物不同,配制的方法就不同.可是你在配流动相时,你会先相到什么,再想到什么,然后还我要注意什么东西了?

大家来讨论一下这个问题.

注意：1.流动相的性质要求
　　一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
　　选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面：
　　①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。
　　②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
　　③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
　　④粘度要低（应<2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。
　　⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。
　　⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。
　2．流动相的选择
　　在化学键合相色谱法中，溶剂的洗脱能力直接与它的极性相关。在正相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而增加；在反相色谱中，溶剂的强度随极性的增强而减弱。
正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。
　　反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。
  在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。
3．流动相的pH值
3．流动相的pH值
　　采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。
注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。
　　4．流动相的脱气
　　HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。
　　溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。
    除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。
　　离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。
　　在线（系统内）脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。此外还有在线脱气机。
　　一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。
　　5．流动相的滤过
　　所有溶剂使用前都必须经0.45µm（或0.22µm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明“已滤过”）。
　　用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。
　　6．流动相的贮存
　　流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
　　磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。

谢谢大家,等回答全面了以后本人将给出一个总结来.

关于流动相的问题，我总结了一些经验。有以下几点：
1）溶解性 不同种类溶解性不尽相同，含极性（相似相溶），能否形成氢键等，还要考虑与样品的溶解性。比如甲醇与乙腈溶解性能不尽相同，甲醇的吸收比乙腈的大，黏度大，但它成本低，毒性小，对盐的溶解度比乙腈大的多，因为它易与盐类形成氢键。
2）互溶问题 有机相与缓冲液在一定比例时会使盐类析出，而损伤仪器。同时不能达到预期的分离效果。配制时予以考虑。
3）PH值问题 无外乎两点。酸式样以低PH值，碱式样以高PH值，已抑制样品离解。如果配置在一起如，只测水相中PH值，再加入适当有机相即可。有机相中PH值不易测准。
4）比例问题 水与有机相加在一起，会使总体积减小。应各自量取后加在一起而不必看配后总体积。
5）过滤与脱气 一般以抽真空过滤法同时解决这两个问题效果好。
6）有效期 水相有效期短的多。有机相可两三个月，水相一般不超十天，注意过滤与更换。

一楼说的十分到位，顶

个人认为还要考虑是否有必要配母液，是否需要避光，等等

准确度和PH值问题。

我再配置流动相的时候首先是想着2种溶剂的比例，然后换算成1000，每个应该量取多少，
然后就是清洗配置流动相过程中说用到的仪器和器皿如抽虑瓶，烧杯，量筒，流动相瓶子等。
接下来就是量取所需的溶液，称取所需的缓冲液，调节ph
再仔细想一边看中间有没有漏掉的环节。核对一下溶液量取数量是否正确

抽虑，脱气

我没接触过,但听老师说能溶能洗.