主题：[转贴]檢量線(1)

這一部分的內容對於色層分析的新進人員, 無論是GC或HPLC, 多多少少都會有一點幫助, 尤其是覺得檢量線老是
有問題的分析人員, 可以參考一下.....

1.檢量線的種類有哪些?
通常校正之檢量線大概可以分為兩大類: 線性(linear)與非線性(nonlinear). 線性校正檢量線為直線通過原點(0,0)的零次校正,和不通過原點的一次校正. 而非線性校正則為二次校正或更高次的校正. 今天的重點則是放在最常使用的線性校正上.線性校正在實際的使用時,最常見的就是"線性回歸校正法"(linear regression), 感應因子法(內標法)及校正因子(外標法)等三種.

2.檢量線的最高及最低濃度差的限制是多少? 最低濃度要怎麼設定?
這個其實並沒有明確的規定, 視各分析的領域而定,當然唯一的要求就是一定要在線性範圍之內, 通常會要求liner regression法的 r 值在0.995以上, 而內(外)標法感應(校正)因子相對標準偏差必須小或等於20%.在實際的使用上, 高低濃度差越大,將會得到更大的誤差, 這種誤差在整個檢量線中,以低濃度的範圍最大, 高濃度的範圍次之, 以檢量線的中段最小, 這其實是很容易了解的, 因為所謂線性回歸,就是把一條曲線硬是拉成一條直線來使用, 這種由彎曲而拉成直線的誤差 , 以在檢量線的頭尾兩端最大,在以百分率表示時,低濃度的誤差就變成一條檢量線中最大的了.
在儀器分析中, 高低濃度差還要考慮到偵測器的線性範圍, 通常就我本身所用的分析檢量線,一般最高與最低濃度差,大概都在10倍左右, 最低濃度"盡量"設定在MDL的3.3倍左右, 如果你用的是LOD, 也就設定在LOD的3.3倍,雖然LOD和MDL並不一樣........, 另外, 如果知道分析樣品的大概濃度, 也最好盡量調整樣品的濃度, 讓待測物的濃度位於檢量線最高濃度的20%～80%之間!!

3.甚麼樣的檢量線才可以用!?
當然,前提是必須先符合前面所說的: liner regression法的 r 值在0.995以上, 而內(外)標法感應(校正)因子相對標準偏差必須小或等於20%. 如果你的分析方法夠嚴謹,就有下面更進一步的管制標準: 你必須注射一針標準品, 通常是檢量線的中間濃度, 分析後的數據代回校正方程式, 如果誤差在20%或15%(對於linear regression是濃度偏差, 內標法是感應因子相對標準偏差, 外標法則是校正因子相對標準偏差  )以內才算是及格可以使用,否則就必須重新製作檢量線. 更嚴謹的作法是以第二個標準品來源(通常就是與製作檢量線之標準品不同製造商), 配製檢量線中間點的濃度,如前一般注射分析計算, 通過前述的管制標準才可以!
以往所見過管制最嚴格的 方法, 在藥物分析 BA/BE測試, 甚至於規定檢量線中每一點所得的積分值皆須代回線性方程式中計算濃度, 如與本身誤差超過15%就算不合格....
就linear regression而言, 如果你相信 r大於或等0.995, 這一條檢量線就可以拿來定量, 有時會有悲慘的後果, 因為這樣會產生很大的誤差! 例如很多的因素會造成迴歸直線在座標上的截距改變, 像這種類似"平移"的變化, 對 r值並不會有太大的變化, 但是"平移" 前後所計算得到的濃度卻會有很大的差別.

4. 檢量線中需要多少點(濃度)?
一般至少五點!  其實點數是越多越好, 但是要考慮成本及分析時間的問題, 有些分析法會製作六點,容許你刪去其中的一點, 但是在這種狀況下, 最高和最低濃度是不能被刪除的!!