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液相色谱（LC）

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主题：【求助】在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样，请问应该怎样确定波长？是选分离好一些的做波长吗？

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starseayang

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发表于：2008/11/11 23:50:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：20积分状态：未解决

在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样，请问应该怎样确定波长？是选分离好一些的做波长吗？

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2008/11/12 0:39:40 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样?应有如下几种情况：1、主峰的保留时间一样，杂质峰的时间不一样导致分离度不同，那说明很可能这个杂质并不是其它波长下检测到的同一个杂质。
2、主峰的保留时间不一致，那说明这个波长下对主成品无吸收，应更换波长，除非不做自身对照，而有杂质对照品时这个方法才可行。
所以最好对样品进行全波长扫描，确定主成品的最大吸收后再选择检测波长

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happy王子矜

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2008/11/12 9:17:19 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最好的微调流动相的比例，让分离更彻底。波长对分离效果的影响如楼上所说。

浓度低的时候分离度总是很容易达到，你应该确定一下，平时所监控的样品杂质大小在什么程度，然后按最大的值和纯品在一起，确定这个情况下分离度达到要求。如果是长期做的样品，而且改杂质是比较重要的控制项，那就要更严格的使其分离更高一点。

如果你用的质量不太好的色谱柱，换一根不同批次的就很有可能需要重新调整流动相系统。这个是非常令人头疼的现象。所以，最好是做条件时给后面的不确定发生的情况留有余地。

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xy200609

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2008/11/12 11:03:35 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

要根据你的分析需要了.是用面积归一法计算,还是用内外标法计算.
如果只想考虑波长达到分离,当然是选择分得好的那个波长了.当然对分析结果不确定性.

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〓猪哥哥〓

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2008/11/12 11:35:21 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 xky0230699 发表:
在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样?应有如下几种情况：1、主峰的保留时间一样，杂质峰的时间不一样导致分离度不同，那说明很可能这个杂质并不是其它波长下检测到的同一个杂质。
2、主峰的保留时间不一致，那说明这个波长下对主成品无吸收，应更换波长，除非不做自身对照，而有杂质对照品时这个方法才可行。
所以最好对样品进行全波长扫描，确定主成品的最大吸收后再选择检测波长

只要系统条件不变，保留时间就不会变。正如上面所说，可能会是其他的杂质。主要看下2峰分离度怎么样，如果还可以的话，选用一个内标物吧。如果不好，最好再选另外一个较大吸收波长。

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