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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【原创】关于分光光度计基线校正的原理和方法

浏览0 回复73 电梯直达

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bihailantian

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2009/2/26 4:44:40 32楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我正要测些样品，遇到关于基线和调零的问题，想请问LZ。
我需要在450-700nm范围内的吸光值数据，但说明书上说调零（Autozero）只在用某一特定波长时使用，基线（Baseline）在用一定范围的波长时使用。那么我该怎样调呢，是不是直接在两个比色池里放空白溶液，调基线，然后就不用调零了。还有关于测定结果的问题，有人建议我把空白的吸光值测出，最后计算时用样品值减空白值，如果测定时参比池放空白溶液，是不是就不用再自己减了？
问题比较多，谢谢了

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dongnan

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2009/2/26 6:05:57 33楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

简单地说：

紫外可见分光光度计确实具有基线校正一说。
一般仪器实在开机的时候，以隐含的程序进行的，这也是紫外分光光度计开机后要等几分钟才能正常使用的原因之一（高精度测试，要等再长一点时间）。

基线校正的本质是做下列两点事情：
1：对灯的能量进行扫描，储存一张灯能量（每个波长点的光线强度）表，在测试中逐点进行补偿，这是保证测光精度的重要环节；

2：通过PEAK SEARCH 功能找到D2灯的565.1nm发射谱线的位置，将这个位置作为原点（参考原点），调整棱镜系统或者光栅驱动系统的原始（零位）角度，以后一起就根据这个位置和已经设置好的步进角度进行波长驱动，这是保证波长精度的重要环节。

经过上述环节（当然还有其他初始化环节，比如：系统自检等等），仪器初始化完成，即可进行测定。

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hsx5108

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2009/3/3 21:23:37 34楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

真的是学习了,长了不少的知识.

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叶子

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2010/5/5 16:40:57 35楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请教一个问题，我用双光束紫外分光光度计测量，“在参比位及样品位上都放上参比”，意思是说每个样品位上都放一个参比液吗？是不是如果我需要同时测5个样品的话，就得放5个参比，然后基线校准啊？因为我在实验过程中遇到这么个问题，我只在参比池和1号样品池中放置了参比液，进行校准后，放入1、2、3号样品池中样品，测量，结果1号的数据和2、3号的两数据不同，为什么出现这样的情况啊？

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叶子

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2010/5/8 17:40:42 36楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

又回来细看了一遍，发现学到了更多，但是有一个疑问：不是说波长变动以后需要重新基线校准吗？
那么文中“校正波长范围要大于分析波长范围；例如、分析设定范围为220nm～500nm，那么校正波长就要设定为210nm～510nm；等待校正结束后再将波长设定回到原来的220nm～500nm范围”这样也可以吗？
希望不是问得很白痴的问题。嘿

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夕阳

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2010/5/8 19:46:22 37楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
又回来细看了一遍，发现学到了更多，但是有一个疑问：不是说波长变动以后需要重新基线校准吗？
那么文中“校正波长范围要大于分析波长范围；例如、分析设定范围为220nm～500nm，那么校正波长就要设定为210nm～510nm；等待校正结束后再将波长设定回到原来的220nm～500nm范围”这样也可以吗？
希望不是问得很白痴的问题。嘿

理解得非常正确

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like7610

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2010/10/26 11:06:26 38楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

受用了，多谢多谢

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zwyu

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2010/10/26 19:02:54 39楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

个人觉得多出的这一段没有必要！除非仪器内部采用了“移动平滑”数据处理。

原文由 夕阳(anping) 发表:
原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
又回来细看了一遍，发现学到了更多，但是有一个疑问：不是说波长变动以后需要重新基线校准吗？
那么文中“校正波长范围要大于分析波长范围；例如、分析设定范围为220nm～500nm，那么校正波长就要设定为210nm～510nm；等待校正结束后再将波长设定回到原来的220nm～500nm范围”这样也可以吗？
希望不是问得很白痴的问题。嘿

理解得非常正确

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这站不远

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2010/10/26 21:22:01 40楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

anping怎全是经典啊

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叶子

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2010/10/29 18:37:09 41楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 zwyu(zwyu) 发表:
个人觉得多出的这一段没有必要！除非仪器内部采用了“移动平滑”数据处理。

原文由 夕阳(anping) 发表:
原文由 tomatoyezi(xiaoanxiaoye) 发表:
又回来细看了一遍，发现学到了更多，但是有一个疑问：不是说波长变动以后需要重新基线校准吗？
那么文中“校正波长范围要大于分析波长范围；例如、分析设定范围为220nm～500nm，那么校正波长就要设定为210nm～510nm；等待校正结束后再将波长设定回到原来的220nm～500nm范围”这样也可以吗？
希望不是问得很白痴的问题。嘿

理解得非常正确

我还是觉得很矛盾，波长变动了要重新校准，校准结束后改动波长，这不又得重新校准吗？

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