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主题：【已应助】【求助】硫酸博莱霉素的成分确定-A2为何会有两个峰?

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zt5518304
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发表于：2009/02/05 00:00:49 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
博来霉素(bleomycin)是由10余种组分组成的混合物, 根据纸色谱Rf值不同分为A、B两族,目前临床使用的博来霉素主要成分为博来霉素A2,和博来霉素B2,USP29中规定:按峰面积归一法A2的含量应在55%到70%之间,B2的含量应在25%到32%之间,B4的含量不超过1%,A2和B2的联合百分含量不少于90%.

现在我们公司从东北一家企业购买了一批货,但是厂家出示的色谱图中A2的峰为两个,如下所示(使用的为USP29标准方法)

结果国外客户提出质疑:说以前他们购入的博来霉素A2色谱图上均为一个峰,这次A2为两个峰(他们自己用HPLC测定的结果也是两个峰),希望我们拿出证据证明这两个峰均为A2.我们打电话给厂家,厂家只说明这两个峰肯定都是A2,分子量都是一样的,但是拿不出质谱图等证明.

现在我们猜测这张图上的两个峰可能是同分异构体(如果不是两种物质的话),想做一个LC-MS来证明我们的推断.请教各位大侠,这样的思路是否可行?是否有更好的办法证明这两个峰均为A2呢?

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2009/2/5 10:02:33 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同分异构体不能使用液质来确定，因为结构断裂方式可能是一样的！它是不是光学异构呢，就是所说的对映体？
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dickwang2008
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2009/2/5 10:07:54 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同意楼上的观点，楼主可以跟厂家确定一下，让他们拿出证据来
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sonickurt
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2009/2/5 10:23:16 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
您好,首先我想问一下博来霉素A2是否是确定的某一种物质呢,还是某一类物质的统称?
  如果是前者,那既然液相能分开,就确定不是一种东西了.
  如果是后者,那就有几种可能了,首先考虑是同类物质,同分异构,手性.

当然,无论它是什么,你首先要明白到底这种东西能不能存在,如果他本身不属于博来霉素A2,你也就没有确证他的必要了.

要证明他是一类东西,首先你要反着推一下,看看两个峰的紫外吸收是不是一样,如果一样再进行下一步的判断.
液质的思路基本行不通,楼上的诸位都说了,建议还是直接上核磁吧.
该帖子作者被版主 capinter加 2积分， 2经验，加分理由：热心应助
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dickwang2008
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2009/2/5 10:31:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sonickurt 发表:
您好,首先我想问一下博来霉素A2是否是确定的某一种物质呢,还是某一类物质的统称?
  如果是前者,那既然液相能分开,就确定不是一种东西了.
  如果是后者,那就有几种可能了,首先考虑是同类物质,同分异构,手性.

当然,无论它是什么,你首先要明白到底这种东西能不能存在,如果他本身不属于博来霉素A2,你也就没有确证他的必要了.

要证明他是一类东西,首先你要反着推一下,看看两个峰的紫外吸收是不是一样,如果一样再进行下一步的判断.
液质的思路基本行不通,楼上的诸位都说了,建议还是直接上核磁吧.


分析很合理，但是上核磁的话，如果样品不纯也基本是没有用的。
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sonickurt
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2009/2/5 10:42:18 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
嗯,同意楼上说的,把样品分离提纯 也不是很轻松的.  不行你把你需要的东西 送到分析中心之类的地方  你把思路告诉他 把前处理做好,如果自己做可能是不大方便.
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abisepu
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2009/2/5 11:50:13 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一种物质两个峰的情况我碰到过多次，还真没找到过鉴定的好方法。。。
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zhufangwei
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2009/2/5 17:22:39 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果是同一个物质的异构体的话使用液相应该不那么容易分离开来，从你提供的色谱图中可以看到两个是分开了，只是分的还不够开，而且你的买家以前使用的条件和他现在试的条件一样么，如果改变液相条件，这两个异构体重叠的可能性是很大的，而且也并不矛盾啊。那么你可以调节一下流动相的比例看看效果如何，如果要确定这两个是不是都是A2，那么还是要用质谱的吧！！！
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zt5518304
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2009/2/5 23:36:08 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
刚刚看到各位的热情回复,虽然我只是一个新人,可是感到非常的温暖,希望能在大家的帮助下一起很好地解决这个问题.

博来霉素(bleomycin)A、B两族的结构式如下所示:

由上图可见由于是发酵产物,A2的结构类似物有很多,我觉得下图中A2的两个峰有两种可能:
1.两个峰均为A2,但由于手性引起保留行为的差异.这也是我想做LC-MS的原因,如果结果显示这两个峰的分子量一样,均为A2的分子量,那么这两个峰很有可能都为A2.

2.其中有一个峰可能是去甲基A2等结构类似物,这应该也能从分子量上看出.
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2009/2/6 0:41:11 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 haoyuaimama 发表:
同分异构体不能使用液质来确定，因为结构断裂方式可能是一样的！它是不是光学异构呢，就是所说的对映体？


haoyuaimama兄,你好!可能我先前的表达不是很清楚.我想确定的是这两个峰是否都为A2,而并非确认他们为同分异构体.我猜测他们是否因为光学异构引起保留时间的变化,所以想用LC-MS验证一下.此外,光学异构也是同分异构体的一种.

原文由 dickwang2008 发表:
同意楼上的观点，楼主可以跟厂家确定一下，让他们拿出证据来

呵呵,我也和厂家联系过,不过他们除了一口咬定这两个峰都是A2外,拿不出证据,因为钱已经汇过去了,也拿他没什么办法,所以这事只能由我们自己在做.
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zt5518304
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2009/2/6 1:16:37 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sonickurt 发表:
您好,首先我想问一下博来霉素A2是否是确定的某一种物质呢,还是某一类物质的统称?
  如果是前者,那既然液相能分开,就确定不是一种东西了.
  如果是后者,那就有几种可能了,首先考虑是同类物质,同分异构,手性.

当然,无论它是什么,你首先要明白到底这种东西能不能存在,如果他本身不属于博来霉素A2,你也就没有确证他的必要了.

要证明他是一类东西,首先你要反着推一下,看看两个峰的紫外吸收是不是一样,如果一样再进行下一步的判断.
液质的思路基本行不通,楼上的诸位都说了,建议还是直接上核磁吧.


博来霉素A2的结构式可见上贴的图片,里面含有手性碳的,如果是光学异构,也都是博来霉素A2,只是不同的构型罢了.如果液质的结果显示两个峰的分子量一样,都为A2的分子量,是否比较有说服力?

如dickwang2008所言,上核磁的话还要进一步制备纯化,那样工作量就相当大了
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