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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【求助】使用可见分光光度计中遇到的问题

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晨心
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发表于：2009/03/13 15:05:44 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
尊敬的menium先生，你好，我想请教一下在使用分光光度计中遇到的一个问题。
请问在使用过程中，参比溶液吸光度调零以后，结果测出的空白溶液的吸光度显示负值，请问为什么会出现这种状况？重新调零后，依然显示负值，是什么原因？
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shuiyingchuan
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2009/3/13 15:18:17 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用的那种型号的分光光度计？

在调零之前机器是否预热

比色皿有没有清洗干净

分光光度计的镜头有没有擦干净

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bobo1318
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2009/3/13 15:19:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也不知道。想请教
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祥子
nemoium
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2009/3/13 15:37:27 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xingshunmei 发表:
尊敬的menium先生，你好，我想请教一下在使用分光光度计中遇到的一个问题。
请问在使用过程中，参比溶液吸光度调零以后，结果测出的空白溶液的吸光度显示负值，请问为什么会出现这种状况？重新调零后，依然显示负值，是什么原因？


你好。用参比调零，然后空白溶液测出的是负值，那就说明空白溶液的透过率大于参比溶液的透过率。

你试试其他样品怎么样呢？其他样品也是这样吗？

前几天，我遇到个仪器，也是参比溶液调零后，试样的吸光度为负值。这几天就要看看这台仪器，如果有了答案，我会贴出来。
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taidi
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2009/3/13 16:40:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
嗯，吸光度负值大吗？不大的话，你还应先看一下比色皿有没问题。如果没问题，楼上所说的可能性较大。
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2009/3/13 16:45:23 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 taidi 发表:
嗯，吸光度负值大吗？不大的话，你还应先看一下比色皿有没问题。如果没问题，楼上所说的可能性较大。


哦，比色皿的差异，倒是也有可能。
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taidi
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2009/3/13 16:48:14 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我的意思是说，两个比色皿透光率相同，就是在完全相同的情况下（都为空或都加同一种液体），以一个为参比，另一个测出吸光度为0.000，那么基本上就是你的空白溶液在此波长条件下透光率比参比溶液更高。
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祥子
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2009/3/13 16:50:21 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 taidi 发表:
我的意思是说，两个比色皿透光率相同，就是在完全相同的情况下（都为空或都加同一种液体），以一个为参比，另一个测出吸光度为0.000，那么基本上就是你的空白溶液在此波长条件下透光率比参比溶液更高。


恩，不错的方法。
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tutm
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2009/3/14 22:15:49 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xingshunmei 发表:
尊敬的menium先生，你好，我想请教一下在使用分光光度计中遇到的一个问题。
请问在使用过程中，参比溶液吸光度调零以后，结果测出的空白溶液的吸光度显示负值，请问为什么会出现这种状况？重新调零后，依然显示负值，是什么原因？

你的参比溶液和空白溶液分别是什么？如果不是一样的溶液，为什么不用样品空白的试剂溶液（包含除了样品之外的全部试剂，处理过程也一样的溶液）做参比呢？试试看，也许就没问题了。
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2009/3/14 22:30:03 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tutm 发表:
原文由 xingshunmei 发表:
尊敬的menium先生，你好，我想请教一下在使用分光光度计中遇到的一个问题。
请问在使用过程中，参比溶液吸光度调零以后，结果测出的空白溶液的吸光度显示负值，请问为什么会出现这种状况？重新调零后，依然显示负值，是什么原因？

你的参比溶液和空白溶液分别是什么？如果不是一样的溶液，为什么不用样品空白的试剂溶液（包含除了样品之外的全部试剂，处理过程也一样的溶液）做参比呢？试试看，也许就没问题了。


其实，我也没搞清这里的参比和空白。
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tutm
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2009/3/14 23:37:39 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
尊敬的menium先生，
哈哈，这几天你回答讲座里各位的问题也折腾得够累的吧！今天是最后一天了，明天（再过半个小时）该放松放松了。

这位楼主还写出了一些操作过程的可分析点，不然只能泛泛谈谈，真是很难判断的。当然我的上述判断也不一定有用。

发生这种情况，如果仪器没有异常，最简单的办法就是：
1. 使用样品浓度为零的溶液做参比调零，扣除全部“背景”；而不要用蒸馏水调零。
2. 使用一个比色皿调零和测试，避免比色皿差异的“后顾之忧”。
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