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主题：【求助】HPLC分析多个氨基酸梯度洗脱时分不开

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tangpozi
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发表于：2009/08/27 14:17:51 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用的流动相是A：0.1mol/l乙酸钠-乙腈97：3，B：乙腈-水80：20
在15min-19min调比例为B泵15%，对照品的峰在这一时段分离度不很高，样品没分开，我调动几个比例都没什么改变，一直调到B泵2%，样品才分开些，但不知怎么多出来几个小些的峰，且时间延迟对后面峰分离也很有影响。想问各位是我设的梯度有问题，还是机器的比例阀出问题啦？因为别人做液相调两个点就会改变很大，而我几乎没改变。
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2009/8/28 0:06:13 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你这个方法成熟吗？当你改变B的比例有些小峰出现，时间肯定会延迟的，你的柱子状态怎么样？一般可能是柱子问题，比例阀出问题很少。
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It is me!
hmzhou83
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2009/8/29 9:28:13 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你应该是做氨基酸衍生了吧？这个比较难做哦。。。

不知你的小峰有多大？影响你的目标峰吗？
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tangpozi
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2009/8/30 11:44:53 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做氨基酸衍生的文献也有一些，但好像没有用在阿胶上的，我用别人文献里的梯度有些峰就分不开，我的柱子是根旧柱子，柱效不高，老师说让先试着。我在想是不是我梯度调的不对
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tangpozi
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2009/8/30 11:56:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是氨基酸的衍生啊，好麻烦的，而且会有衍生试剂留的杂质峰。那几个小峰和大峰有部分重叠，再分下去时间太长了
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hujiangtao
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2009/9/2 14:58:32 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般都要衍生呀
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yuan_log
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2009/9/2 16:24:14 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tangpozi 发表:
是氨基酸的衍生啊，好麻烦的，而且会有衍生试剂留的杂质峰。那几个小峰和大峰有部分重叠，再分下去时间太长了

我一般都是用WATERS的氨基酸分析包做氨基酸的，效果还算好，建议楼主看看相关资料，呵呵。
送上一份说明吧
我的石头^_^
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tangpozi
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2009/9/21 10:15:15 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢你啊，现在才回复你，我用的是PITC，不能再改其他了，要是有也用PITC做衍生化的可以交流下就好
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laott
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2009/9/24 13:39:54 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱前衍生化后用C18柱做17种氨基酸分的还可以的，可能是你的柱子不好吧
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tangpozi
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2009/9/24 19:18:08 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 laott 发表:
柱前衍生化后用C18柱做17种氨基酸分的还可以的，可能是你的柱子不好吧
我17个峰还挺好的，还有2个不知没出来还是怎的，胱氨酸和半胱氨酸会重叠在一起不？今天我进了一针水和乙腈混合液体想洗一下进样阀，结果出来的居然也有那一大坨杂峰，真不知怎么去掉了
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congmingdeyu
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2009/12/7 23:06:12 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我觉得柱前衍生做氨基酸 定性还可以  定量计算时候感觉不好  相差比较大
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