一些处理区带毛细管电泳柱子的方法1、开毛细管电泳柱子的检测口购买来的柱子要上仪器,第一步就是量取好所需长度,开检测口。
先介绍一下开检测口的方法:
(1)用刀片刮去毛细管柱子的表面涂层2mm如图1、2;
(2)用火烧去一部分涂层;将要开检测口的两端用铝薄片包上,留出2mm,放在火焰上烧取表层,看见柱表面变黑,撤走火焰,用酒精棉擦去炭化的表层即可。
(3)用硫酸出去一部分涂层,此法硫酸腐蚀性强,处理起来不方便,不建议用此法!
2、毛细管电泳柱子的前处理方法分为国内柱子和随国外仪器配备的柱子。
(1)国内柱子处理步骤:
先用1M的盐酸冲洗半个小时左右,然后再用1M的氢氧化钠冲洗30分钟左右,0.1M的氢氧化钠冲洗到基线基本平直为止,之后用水去离子水冲洗柱子,最后用缓冲溶液平衡柱子,这样柱子很好用!
由于毛细管裸管的表面是硅氧键的形式存在,活化的目的一是冲去柱子内的污垢如一些固体附着物等如图3,另外一个更重要的原因是打开硅氧键,生成硅羟基,在缓冲溶液里面硅羟基可以生成双电层如图4,是产生毛细管电泳的驱动力电渗流的原因,其实毛细管电泳仪是电泳和电渗共同作用的结果,从而达到使部分带电性差异物质更好的分离,即引入分离的因素。
(2)国外柱子(购买仪器时所配的柱子)处理步骤:
先用甲醇(色谱纯)冲洗柱子3分钟,主要是去除毛细管柱子中的酯类物质,用去离子水冲洗柱子1分钟,用以去除甲醇,用0.1MNaOH冲洗柱子冲洗30分钟,用来平滑管壁,活化毛细管内壁的硅羟基,去离子水冲洗1分钟,去除NaOH,最后同国产柱子一样用缓冲溶液冲洗柱子。
3、样品之间毛细管柱子的冲洗平衡(1)进样前先用缓冲溶液清洗,以保持毛细管的清洁及缓冲溶液与毛细管内壁的平衡
(2)在运行10-20个样品之后最好换在以0.1MNaOH冲洗,用水清洗毛细管柱子,用以去除毛细管内壁吸附物质,然后再用缓冲溶液平衡!
4、实验结束后的毛细管柱子的处理:实验结束后,如果很长时间不使用毛细管柱子应先用水清洗柱子5分钟,然后换上空瓶,吹干毛细管柱子!
5、取出毛细管柱子使用时,如果发现毛细管柱子堵了,可按如下方法处理:(1)取下堵塞的柱子,先将柱子两端分别截掉2mm左右的长度,然后用仪器的压缩泵吹吹试试,进样端方上缓冲溶液,出口端放一空瓶,看看能不能通,如果不通我们在采用下一个步骤;
(2)仪器本身吹不通,我就可以用钢瓶在试试,刚瓶的压力能大一些;
(3)还可以采用手动泵的方法,将柱子于手动泵连接在一起放在超声里边,如果柱子不是出厂的问题,这个方法最能解决问题