主题：【原创】紧急求助：用HPLC分析3、4、5-三羧酸苯胺相关问题（研究生色谱课考试题，不会，所以求助高手）

如果从HPLC的测定中找出测定带来的误差，主要是待测物质与流动相之间的变化，很明显酸性条件下的测定有副反应发生，这个色谱条件不适合。

问题1：如上进行实验检测购买的标准品，发现主峰A：RT=4min,在RT=12min处有杂质B。按面积归归一法计算，A%=90%，B%=10%。但出厂报告单表明化合物浓度大于99%。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。
答：三氟乙酸浓度比较大，可能与3、4、5-三羧酸苯胺反应生成了Rt＝12min的杂质B，产物也许是一种酰胺。发现这一情况后，将三氟乙酸换成磷酸，用磷酸调节pH就不会产生杂质B了，看不到杂质B的峰，因此归一化得到的浓度大于99％。

问题2：问题解决完成以后，测试合成产品的质量，发现与对照品一致，纯度很好，于是出具合格单，产品卖出。但客户却反馈回来说明化合物只有90%的含量。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。
答：客户用的方法可能与问题1上出现杂质B峰时的分析方法相同，也有可能不同。说它可能相同是因为，恰好两个方法得到的结果都是90％，因此两种方法有相同的可能性。说它们不同是，有可能客户用了另外一种正确的能准确测定3、4、5-三羧酸苯胺含量的方法，也得到了90％的含量。如果是第二种情况，即客户所用的方法是正确的，结果是正确的，那么很有可能是因为主峰ARt出峰太快，与杂质峰没能很好的分开，合成了一个峰。因此，需要调整方法增大主峰A与杂质峰的分离度，具体方法：用纯水相条件同时调节pH到一个稍高的值。

问题3：采用问题1得到的方法进行含量分析，发现结果很好。但是采用亚硝酸或酸碱滴定，发现化合物含量只有90%左右，请分析此产品的纯度好坏，还可以用什么方法来判断此产品的纯度。
答：此产品的纯度不好，酸碱滴定的方法虽然准确度可能通常没有HPLC的高，但是大致的浓度还是不会相差太大的，100％－90％＝10％这么大的差距通常比较少，因此可以大致说明这个样品至少是不纯的。紫外分光光度法也是一个测试含量不错的方法，可以用来分析纯度。至于气相的方法，根据结构来判断，可能3、4、5-三羧酸苯胺沸点太高，并不适合。

问题4：从问题1、2、3，说明HPLC的正确使用？
答：这说明利用HPLC来进行分析时，需要注意以下几点：
1）流动相中的各组成不能与待测样品反应；
2）保留时间不能太接近死体积处，出峰太快，容易造成杂质干扰或峰重叠；

嗯，这是一道不错的题目。

不错
    同意楼上的

合成方法没问题，生产过程中的问题，这东西生产一般有70%以上的收率