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主题：【求助】关于交联葡聚糖凝胶柱

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grz
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发表于：2010/02/21 17:37:15 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
交联葡聚糖凝胶柱Sephadex-G10用于测定抗生素的高聚物杂质，有两个问题：极限排阻为700分子量，是不是意味着分子量700以内的成分才能够有效测定；出峰峰形不能有效分开，从柱本身和样品两方面考虑问题主要可能出在哪些方面。
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2010/2/21 19:25:15 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。例如Sephadex G-50的排阻极限为30,000，它表示分子量大于30,000的分子都将直接从凝胶颗粒之外被洗脱出来。
2、一个是色谱柱选择不合适，一个是流动相不合理，如组成成分，PH,流速，温度等也有影响。
该帖子作者被版主 liwei7893加 5积分， 2经验，加分理由：鼓励应助。
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grz
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2010/2/22 8:28:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢xky0230699将军，那么对于G-10排阻限度为700D来说，是不是从700D往下才正常出峰，而700D以上的就是快速流出，反映到图上会是什么情况呢，再比如样品是，500D以下99.2%,650D左右0.1%,700~1000D左右0.2%,其他为1000D以上。还有一个问题，Sephadex G-15 分离:肽及球形蛋白质：100～1500；葡聚糖（线性分子）：100～1500 ；这两个指标能给解释一下吗？
  再次感谢！
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tigertooth
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2010/2/22 9:13:39 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
排阻限是有最低和最高排阻限的，在其间的可以分离，其外的不能分离或分离不好。
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2010/2/22 9:50:35 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
排阻限是有最低和最高排阻限的，在其间的可以分离，其外的不能分离或分离不好。

在出峰上，不能进入的成分会是什么反映呢
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有水有渝
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2010/2/22 21:12:21 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 grz(grz) 发表:
原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
排阻限是有最低和最高排阻限的，在其间的可以分离，其外的不能分离或分离不好。

在出峰上，不能进入的成分会是什么反映呢


1、不能进入的表现出峰很快，几乎与死体积相当。

2、Sephadex G-15 分离:肽及球形蛋白质：100～1500；葡聚糖（线性分子）：100～1500 ：就是指分析此类样品的适用范围了。
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