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主题：【求助】OPA衍生氨基酸的条件

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zhongzea
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发表于：2010/03/16 16:25:51 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
OPA衍生氨基酸的条件，本人最近在做氨基酸，衍生效果不好，请教各位大侠！
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2010/3/16 20:25:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做的是什么样品？
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柏坡
hgycook
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2010/3/16 23:26:44 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我这有个类似的方法您可以参考下：
摘抄：“在上述色谱条件下，将标准的和欲测浓度的赖氨酸盐酸盐溶液经衍生化后进样分析,赖氨酸衍生物的色谱峰的保留时间约为6.2 min.除注射OPA溶液时也出现的一些小峰外，未见其他峰.所得色谱图见图3.对赖氨酸衍生物峰测得的柱效约为10 000/m.　　在本实验中发现，OPA与氨基酸反应产生的紫外吸收或荧光物质的归属仍然存在一些疑问.最早提出用OPA作氨基酸的衍生化试剂的Roth〔2〕指出，如果在衍生化时先在氨基酸中加入OPA，最后加入巯基乙醇，产生的荧光强度比在OPA和巯基乙醇的混合溶液中加入氨基酸溶液减少许多，他认为这提示在巯基乙醇不存在时，OPA会与氨基酸生成非荧光的产物.这种产物(很可能是Schiff碱)不能进一步与巯基化合物生成荧光化合物.Roth还指出，已经生成的衍生物置于pH6.0～11.5条件下时，其荧光强度不变；赖氨酸在衍生化时最佳的条件是pH6.0～7.0.作者发现，只有存在硼酸钠缓冲剂时，OPA、巯基乙醇才能与赖氨酸生成在338 nm波长处有较强吸收的产物；并且当上述产物与加有0.1% TEA的流动相等量混合时，这种吸收消失，提示可能发生了某种反应，反应产物与原产物的紫外图谱不同，见图4.说明AmionQuant方法衍生化的产物是复杂的，在一些条件下能产生有紫外吸收的产物，即使已经产生，在pH等条件发生变化的情况下也会分解；而在衍生化产生紫外吸收物质的同时又会产生不相同的荧光化合物，这个(或这些)荧光化合物在pH7.5～12范围内相当稳定.”
附件：
氨基酸.doc
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wumingpu
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2010/3/19 13:49:57 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主为什么不用柱前衍生呢，效果也很好啊
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