主题：HPLC日常维护办法 六则

HPLC日常维护办法之二：漏液


漏  液

通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A、        接头处漏液
原 因
解决方法

1、接头松动
1、拧紧

2、接头磨损
2、更换

3、接头过紧
3、a、拧松，再重新拧紧

  b、更换

4、接头被污染
4、a、拆下清洗

  b、更换

5、部件不匹配
5、使用同一品牌的配件


B、        泵漏液
原 因
解决方法

1、单向阀松动
1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）

  b、更换单向阀

2、接头松动
2、拧紧接头（不必拧的过紧）

3、混合器密封损坏
3、a、更换混合器密封

  b、更换混合器

4、泵密封损坏
4、维修或更换泵密封件

5、压力传感器损坏
5、维修或更换压力传感器

6、脉冲阻尼器损坏
6、更换脉冲阻尼器

7、比例阀损坏
7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换

  b、检查手紧接头，损坏的立即更换

8、放空阀的损坏
8、a、拧紧放空阀

  b、更换放空阀


C、        进样阀漏液
原 因
解决方法

1、转子密封损坏
1、重新安装或更换进样阀

2、定量环阻塞
2、更换定量环

3、进样口密封松动
3、调整

4、进样针头尺寸不合适
4、使用恰当的进样针

5、废液管中产生虹吸
5、保持废液管高于废液液面

6、废液管阻塞
6、更换或疏通废液管


D、        色谱柱漏液
原 因
解决方法

1、尾端接头松动
1、拧紧接头

2、卡套内有填料
2、拆下、清洗卡套、重新安装

3、筛板厚度不合适
3、使用合适的筛板（参考下表）


筛板选择指导

物质粒径
筛板孔径

3-4u
0.5u

5-20u
2u


E、        检测器漏液
原 因
解决方法

1、流通池垫片损坏
1、a、避免过大的背景压力（压力降）

  b、更换垫片

2、流通池窗破碎
2、更换窗口

3、手紧接头漏液
3、拧紧或更换

4、废液管阻塞
4、更换废液管

5、流通池阻塞
5、重新安装或更换

HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题



液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、        峰拖尾
原 因
解决方法

1、筛板阻塞
1、a、反冲色谱柱

  b、更换进口筛板

  c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷
2、填充色谱柱

3、干扰峰
3、a、使用更长的色谱柱

  b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误
4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

图
5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂

  b、更改色谱柱


B、        峰前延
原 因
解决方法

1、柱温低
1、升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当
2、使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载
3、降低样品含量

4、色谱柱损坏
4、见A1、A2


C、        峰分叉
原 因
解决方法

1、          保护柱或分析柱污染

图
1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相
2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。


D、        峰变形
原 因
解决方法

1、样品过载
1、减少样品载量


E、        早出的峰变形
原 因
解决方法

1、样品溶剂选择不恰当
1、a、减少进样体积

  b、运用低极性样品溶剂


F、        早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原 因
解决方法

1、柱外效应
1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）

  b、使用小体积的流通池


G、        K’增加时，脱尾更严重
原 因
解决方法

1、二级保留效应，反相模式
1、a、加入三乙胺（或碱性样品）

  b、加入乙酸（或酸性样品）

  c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）

  d、更换一支柱子

2、二级保留效应，正相模式
2、a、加入三乙胺（或碱性样品）

  b、加入乙酸（或酸性样品）

  c、加入水（或多官能团化合物）

  d、试用另一种方法

3、二级保留效应，离子对
3、加入三乙胺（或碱性样品）


H、        酸性或碱性化合物的峰拖尾
原 因
解决方法

1、缓冲不合适
1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液

  b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液


I、            额外的峰
原 因
解决方法

1、样品中有其他组份
1、正常

2、前一次进样的洗脱峰
2、a、增加运行时间或梯度斜率

  b、提高流速

3、空位或鬼峰
3、a、检查流动相是否纯净

  b、使用流动相作为样品溶剂

  c、减少进样体积


J、          保留时间波动
原 因
解决方法

1、温控不当
1、调好柱温

2、流动相组分变化
2、防止变化（蒸发、反应等）

3、色谱柱没有平衡
3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱


K、        保留时间不断变化
原 因
解决方法

1、流速变化
1、重新设定流速

2、泵中有气泡
2、从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当
3、a、更换合适的流动相

  b、选择合适的混合流动相


L、        基线漂移
原 因
解决方法

1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）
1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

图

2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体
3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化
5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
10、将波长调整至最大吸收波长处


M、      基线噪音（规则的）
原 因
解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气
1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液

图
2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全
3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
4、减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备
5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动
6、在系统中加入脉冲阻尼器


N、        基线噪音（不规则的）
原 因
解决方法

1、          漏液

图
1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
2、检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶
3、选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题
4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

5、系统内有气泡
5、用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡
6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）
7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8、检测器灯能量不足
8、更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞
9、更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置


O、        宽峰
原 因
解决方法

1、流动相组成变化
1、重新制备新的流动相

2、流动相流速太低
2、调节流速

3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）
3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确
4、调整设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、检测器对反应时间或池体积响应过大

c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大

d、记录仪响应时间太长

图
5、         

a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品

b、减少响应时间或使用更小的流通池

c、 使用内径为0.007-0.01的短管路

d、减少响应时间

6、缓冲液浓度太低
6、增加浓度

7、保护柱污染或失效
7、更换保护柱

8、色谱柱污染或失效，塔板数较低
8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷
9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低
11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大
12、使用较小的时间常数

P、        分离度降低
原 因
解决方法

1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）
1、重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞

图
2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。


Q、        所有的峰面积都太小
原 因
解决方法

1、检测器衰减设定过高
1、减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大
2、设定较小的时间常数

3、进样量太少
3、增大进样量

4、记录仪连接不当
4、使用正确的连接


R、        所有的峰面积都太大
原 因
解决方法

1、检测器衰减设定过低
1、采取较大的衰减

2、进样过多
2、减少进样量

3、记录仪连接不正确
3、正确连接记录仪

HPLC日常维护办法之四：进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。

A、        手动进样阀，转动不灵
原 因
解决方法

1、转子密封损坏
1、更换或调整转子密封

2、转子太紧
2、调整转子的松紧度


B、        手动进样阀，载样困难
原 因
解决方法

1、进样阀安装不当
1、重新安装

2、定量环阻塞
2、清洗或更换定量环

3、进样器污染
3、清洗或更换进样器

4、管路阻塞
4、清洗或更换管路


C、        自动进样阀，不能转动
原 因
解决方法

1、无压力（或电源）
1、提供恰当的压力（电源）

2、转子太紧
2、调整转子的松紧度

3、进样阀安装不当
3、重新安装


D、        自动进样阀，其它问题
原 因
解决方法

1、阻塞
1、清洗或更换阻塞部件

2、机械故障
2、见随机维修手册

3、控制器故障
3、维修或更换控制器

HPLC日常维护办法之五：由气味、景象和声音可以发现的问题


  由气味、景象和声音可以发现的问题

你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。

A、        溶剂的气味
原 因
解决方法

1、漏液
1、见section 3

2、溅出
2、a、检查废液瓶是否已满

  b、找到溅出的部位并清洗干净


B、        热气味
原 因
解决方法

1、仪器过热
1、a、检查并调节通风设施

  b、检查并调节温度设定

  c、关掉仪器，查找维修手册


C、        读数不正常
原 因
解决方法

1、压力不正常
1、见section 2

2、柱温箱问题
2、

a、检查并调节设定

b、参照用户手册

3、检测器灯失效
3、更换灯


D、        灯警告
原 因
解决方法

1、压力超出极限值
1、

a、检查是否阻塞

b、检查并调节极限值的设定

2、其它警示灯
2、见用户手册


E、        警告音
原 因
解决方法

1、溶剂泄漏/溅出
1、找到并解决

2、其它警告音
2、见用户手册


F、        刺耳的短音或长音
原 因
解决方法

1、轴承失效
1、见用户手册

2、润滑不够
2、进行恰当的润滑

3、机械故障
3、见用户手册

HPLC日常维护办法之六：常见故障及日常维护


    常见故障及日常维护

下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。

溶剂瓶

问 题
维 护

1、进口筛板阻塞
1、

a、更换（3-6个月）

b、过滤流动相，0.5u滤膜

2、气泡
2、流动相脱气


泵

问 题
维 护

1、气泡
1、流动相脱气

2、泵密封损坏
2、更换（3个月）

3、单向阀损坏
3、过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀


进样阀

问 题
维 护

1、转子密封损坏
1、

a、不要拧的过紧

b、过滤样品


色谱柱

问 题
维 护

1、筛板阻塞
1、a、过滤流动相

  b、过滤样品

  c、运用在线过滤或保护柱

2、柱头塌陷
2、a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）

  b、使用保护柱

  c、使用预柱（饱和色谱柱）




检测器

问 题
维 护

1、灯失效，检测器响应降低，噪音增大
1、更换（6个月）或准备备用灯

2、流通池有气泡
2、a、保持流通池清洁

  b、池后使用反压抑制器

  c、流动相脱气


一般

问 题
维 护

1、腐蚀/摩擦损坏
1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁

不错，顶！

谢谢楼主。

东西很多啊，谢谢啊