主题：【第三届原创大赛】油菜种子脂肪酸提取与含油量测定(应要求更新数据)

维权声明：本文为Anna16236原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

这个方法是我摸过各种条件后开始应用的，对于水浴或超声、是否加甲苯、是否一定要氮吹等均做过比较实验，可以说现在建立的这个是一个比较成熟的方法了，去年我用它测了800多个样，测的数据比较准确，有做脂肪酸测定的朋友们可以参考！

油菜种子脂肪酸提取与含油量测定（水浴法）
1、试剂：
甲醇 分析纯；甲苯 分析纯；正己烷 分析纯；石油醚（90-120℃）分析纯；      2,6-二叔丁基对甲酚（BHT） 化学纯；氯化钠 化学纯；浓硫酸 分析纯；      Methyl heptadecanoate(C18H36O2)作内标；
2、实验步骤：
⑴ 试剂配制：5%（体积百分比）浓硫酸/甲醇溶液；0.2%（质量百分比）BHT/甲醇溶液；2.5mg/ml碳十七脂肪酸甲酯/石油醚（90-120℃）溶液；0.9%（质量百分比）NaCl/水溶液；
⑵ 在分析天平上称5颗（约10-25mg）大小形态相似、质量相近的油菜种子加入20ml钳口顶空瓶中，用玻棒将其捣碎，加入5%浓硫酸甲醇溶液2mL（分两次加，每次1ml），将玻棒冲洗干净后依次向瓶中加入如下试剂：0.2%BHT溶液25µL，甲苯300µL；
⑶ 用压盖器将顶空瓶用带聚四氟乙烯垫的铝盖封好，将上述混合物轻微晃动混匀，然后于恒温水浴锅中90~95℃水浴1.5h提取；
⑷ 提取结束后取出冷却至室温，用启盖器启盖后加入100µL 2.5mg/mL碳十七脂肪酸甲酯作内标，再加入0.9%NaCl 2mL，稍微振荡，用3mL正己烷萃取，萃取时用移液枪取上清液再吹入瓶中，反复3-4次以保证萃取完全，将上清液转移至10mL离心管中；
⑸ 得到的萃取物在氮吹仪下吹干，然后用1mL的正己烷溶解定容，涡旋2-3s，再离心（转速4500rpm、时间5min、温度4℃）取上清液；
⑹ 进行气相色谱分析（气相色谱仪的工作条件：FID氢火焰离子化检测器，HP-INNOWax色谱柱，进样口温度250℃，分流比80:1，检测器温度260℃，色谱柱初温210℃，9min，程序升温20℃/min，升至230℃，并在此温度下维持8min）；
3、油菜种子油脂含量的计算
计算公式：油脂含量%＝(S1/S2)×N/M
S1— 总峰面积；      S2— 内标峰面积；
N — 内标用量；      M— 种子质量。
同一样品进行2~3次提取实验，所得结果间的差异应在2%以内，再取平均值。
。