主题:【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束)

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zxhcnf
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plexu您好!我有以下问题想请教:
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph在2左右。


pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失,包括C18和封尾试剂的水解,封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐,如果不含缓冲盐,只是短期几天保存在酸性流动相中,也不必过份担心,最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱,因此减少几天的使用寿命吧;有缓冲盐就麻烦一点,保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出,对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的,那就好,但是对于峰形的问题还是很发愁,昨天还出了一个问题,同一个样品,在一台仪器上出来时分叉的峰,在另一台是一个峰,并且纯度还蛮高的,出封时间在8-10min,不知道咋办了,所用的条件应该是一样的

两台仪器用的是一根柱子不?如果不是一根柱子就说明是柱子的问题


根据wkfei1128所说的这个现象,我认为有可能是仪器的问题,也有可能是柱子的问题;要查明到底是仪器还是柱子上的因素引起的其实很简单,只要把需要做样的这根色谱柱分别接到两台不同的仪器上分析这个样品即可,需要注意的是,查原因的时候不能接保护柱,特别是填料与色谱柱不匹配的保护柱,因为保护柱上的污染物有时会引起峰形分叉,用填料与色谱柱不匹配的保护柱也有可能造成这种分叉峰。所以,我们需要更确切一些的证据才能确认到底是什么原因引起的,在这之前什么结论都不应该下,因为在查明之前所有的因素都应该算作可能的原因。

如果是仪器的问题,能有些什么问题?我倒认为是竹子的问题


我不认为直接下结论是一个好的方式,仪器上管路有污染也有导致峰形分叉的可能,还有单泵运行和双泵运行在流速会有差异,很多售后服务的案例表明,仪器上的差异会导致峰形的变化,毕竟nothing is impossible,查原因需要谨慎一点好
wqm321
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原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
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plexu,月旭的色谱柱是用自己的填料么?好像应该是国产的吧,好贵啊!

月旭的色谱柱有三个系列,Xtimate,Ultimate,Welchrom三个系列。其中前两个系列是美国原装的,第三个系列是在国内填装的,所用的填料是美国Welch公司生产的。
您说好贵,那一定是您自己没有购买过,呵呵,对吧?
购买过的人都会知道,月旭色谱柱的价格是非常合理,适中的。

我是两年前买的,在经销商那里买的,xb和aq的都用过,250*4.6 5u的当时价格是2700多,不知现在什么价格了!不过这些常规的柱子效果还可以!
乐果
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plexu您好!我有以下问题想请教,
请问:我们有一台waters1525色谱仪,最近基线总是呈现波浪形很有规律,波长越小越明显,梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形,很影响分析,我想问一下,是不是柱子的原因,用的是C18上海安普的?麻烦了1

你看压力稳定不?我估计很有可能是柱子的问题,柱子里面有强保留性物质,建议先把柱子清洗干净,用甲醇或者异丙醇冲洗,不接检测器。

您好!我换了一根新柱子可还是出现上述情况,请问还有哪些原因能够造成上述情况,能给解析一下么?谢谢,各位操作液相色谱的没出现过上述情况么?
乐果
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plexu,月旭的色谱柱是用自己的填料么?好像应该是国产的吧,好贵啊!

月旭的色谱柱有三个系列,Xtimate,Ultimate,Welchrom三个系列。其中前两个系列是美国原装的,第三个系列是在国内填装的,所用的填料是美国Welch公司生产的。
您说好贵,那一定是您自己没有购买过,呵呵,对吧?
购买过的人都会知道,月旭色谱柱的价格是非常合理,适中的。

我是两年前买的,在经销商那里买的,xb和aq的都用过,250*4.6 5u的当时价格是2700多,不知现在什么价格了!不过这些常规的柱子效果还可以!

您说的这个价格,我认为还可以,是大众的接受范围。
乐果
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plexu您好!我有以下问题想请教:
请问月旭公司的液相色谱柱接头是大众的还是有自己的规格,我们是waters的分析仪,有月旭的产品可不可以?
乐果
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plexu您好!我有以下问题想请教:
请问:还有一个问题,色谱柱的接头,出口处用的是peek接头,请问都用peek接头不行么,为什么?
xue2009
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原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
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plexu您好!我有以下问题想请教,
请问:我们有一台waters1525色谱仪,最近基线总是呈现波浪形很有规律,波长越小越明显,梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形,很影响分析,我想问一下,是不是柱子的原因,用的是C18上海安普的?麻烦了1

你看压力稳定不?我估计很有可能是柱子的问题,柱子里面有强保留性物质,建议先把柱子清洗干净,用甲醇或者异丙醇冲洗,不接检测器。

您好!我换了一根新柱子可还是出现上述情况,请问还有哪些原因能够造成上述情况,能给解析一下么?谢谢,各位操作液相色谱的没出现过上述情况么?

检查下压力稳定不,有没有哪里漏液?再就是是不是检测器脏了
plexu
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原文由 dongyuzhang520(dongyuzhang520) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教,

我们在用的氨基柱时,有时候峰型突然变宽,有拖尾,用一段时间就又好了,不明白是什么原因造成的,如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢?是像您先前回答的问题中提到的,用一定比例的氨水冲洗吗?

氨基柱可以直接用纯水冲洗吗?记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲?是这样的吗?如果可以冲的话,一般冲多久?

谢谢!


氨基柱的硅胶孔内的氨基浓度非常高(大约有1mol/L),在有水存在的时候,在孔内形成一个pH10左右甚至超过10的很强的碱性小环境,并会导致硅胶基体慢慢溶解。不过硅胶基体的溶解会生成酸性的硅醇基,又会降低孔内的pH值,延缓硅胶基体的溶解进程。一段时间后,两个相反的过程会达成一个动态平衡,从而稳定下来。对你问题提到的这个现象,我想到的是这个原因。

氨基柱,要看氨基柱的应用模式,是正相还是HILIC?这两种模式的情况是大不相同的。正相使用,一般很怕有水。但HILIC模式应用,一般流动相是乙腈/水,是不怕水的。不过键合氨丙基基团非常容易水解,所以一般氨基柱不适宜保存有水的溶剂中。作为正相应用时,流动相中要求一点都不能含水,但清洗柱子上的污染物质,是可以含水的,因为水有强极性,在正相色谱上洗脱能力极强,当然不必用100%纯水。氨基柱具体冲洗方法,正相条件按照正相硅胶柱的清洗方法,HILIC模式按C18柱的清洗方法。
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2010/8/2 13:38:35 Last edit by plexu
plexu
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原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
请问:还有一个问题,色谱柱的接头,出口处用的是peek接头,请问都用peek接头不行么,为什么?


都用PEEK接头我认为都可以的,当然PEEK接头的质量要过关。有人认为PEEK接头不耐压,估计是针对品质不好的产品说的。
plexu
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原文由 wqm321(wqm321) 发表:
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原文由 wqm321(wqm321) 发表:
plexu,月旭的色谱柱是用自己的填料么?好像应该是国产的吧,好贵啊!

月旭的色谱柱有三个系列,Xtimate,Ultimate,Welchrom三个系列。其中前两个系列是美国原装的,第三个系列是在国内填装的,所用的填料是美国Welch公司生产的。
您说好贵,那一定是您自己没有购买过,呵呵,对吧?
购买过的人都会知道,月旭色谱柱的价格是非常合理,适中的。

我是两年前买的,在经销商那里买的,xb和aq的都用过,250*4.6 5u的当时价格是2700多,不知现在什么价格了!不过这些常规的柱子效果还可以!


2700多,相对于国外其它品牌同类产品,价格也是适中。如果你一次购买数量多的话,也应该能得到更多优惠吧。
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