主题：【第三届原创参赛】UPLC-MS-MS法检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物和亮绿

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发表于：2010/08/19 18:11:40 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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文记：虽然国内外关于孔雀石绿和结晶紫的检测方法的文献已是不胜枚举，但是本文在传统方法的基础上加入了创新元素，不仅解决了传统方法结晶紫回收率不稳定和净化效果不好的问题，还引入了亮绿的一齐分析，方法是经过反复验证的可靠的。

UPLC-MS-MS法检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物和亮绿

摘要本文采用乙腈提取水产品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隠色结晶紫、亮绿五种化合物,然后液液分配到二氯甲烷层，10%氯化钠水溶液去除水溶性杂质，无水硫酸钠脱水及过滤固体杂质。浓缩定容后，过中性氧化铝柱净化，采用UPLC-MS-MS进行检测，各标准曲线相关系数均 >0.992, 在0.1、0.2μg标准物质添加水平,五种化合物水产品加标回收率在70%-120%之间.方法简便、快捷、稳定、灵敏度高，定量下限为5μg/kg，可满足水产品上述五种药物的检测的要求。

关键词孔雀石绿（MG）结晶紫（CV）隐色孔雀石绿（LMG）隠色结晶紫（LCV）亮绿（BG）

超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS-MS)

前言：孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隠色结晶紫、亮绿属于碱性三苯甲烷类染料，具有类似的结构（见图1），在水产养殖过程中，常作为杀菌剂和抗寄生虫药，用于防治各种鱼病。由于三苯甲烷具有致突变、致畸和致癌作用，欧美、中国和日本等宣布严禁在水产养殖中使用孔雀石绿和结晶紫，并规定孔雀石绿（含隐色孔雀石绿）和结晶紫（含隐色结晶紫）不得检出。

图1.五种化合物结构图

Map 1. Structure map of five compounds

一、试剂与材料

1.1仪器材料 UPLC- Quattro Premier XE超高效液相色谱-串联质谱仪，Waters公司生产；飞利浦食品加工机；高速离心机TDL-5-A，上海飞鸽；旋涡混合器XW-80A，上海青浦沪西；旋转蒸发仪NA-1001-WA，日本东京EYELA；中性氧化铝小柱(LC-Alumina-N)：100mg,3mL

1.2试剂和标准品 孔雀石绿（MG）、结晶紫（CV）、隐色孔雀石绿（LMG）、隠色结晶紫（LCV）、亮绿（BG），德国Dr.Ehrenstorfer公司；乙腈、二氯甲烷、异丙醇、乙酸铵、甲酸、冰乙酸均为色谱纯，天津科密欧公司，氯化钠、硫酸钠是分析纯，天津科密欧公司；超纯水，Millipore超纯水器自制。

1.3 标准品的配制

1.3.1标准储备液配制：分别称取10.0000mg（精确至0.0001mg）的MG、LMG、CV、LCV、BG五种标准品，用乙腈溶解并定容至100mL,制成浓度为100μg/mL的标准储备液，0-4℃避光保存

1.3.2混合标准储备液配制：各取MG、LMG、CV、LCV、BG储备液10mL，用乙腈稀释定容至100mL,制成浓度为10μg/mL的混合标准储备液，0-4℃避光保存

1.3.3混合标准中间液及工作液配制：移取10mL混合标准储备液，用乙腈稀释定容至100mL,制成1μg/mL的混合标准中间液，标准品工作液按照需要逐级稀释，低浓度标准品工作液临用时使用定容溶剂稀释配制。

1.4 试剂的配制

1.4.1乙腈、0.1%的甲酸：取0.5mL甲酸加入到500mL的乙腈中，摇匀；

1.4.2 5mmol/L乙酸铵水溶液、0.1%的甲酸：称取0.19g乙酸铵溶于500mL水，然后向其中加入0.5mL甲酸，摇匀；

1.4.3定容溶剂：乙腈：5mmol/L乙酸铵（冰乙酸调节PH=4.5）=8：2。