主题：【分享】WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）

量的试剂和HPLC级溶剂；（2）过滤流动相和溶剂；（3）脱气；（4）工作时使用泵头的排水孔不停的用10%甲醇/水的混合溶剂冲洗柱塞杆；（5）不让水和腐蚀性溶剂滞留在泵中；（6）定期更换垫圈；（7）加润滑油。处于良好操作状态的泵，应该使色谱图上的基线平稳，保留时间的重复性良好。等度洗脱时压力波动小于±2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。
3.2  常规准备工作 包括：开通电源，溶剂脱气，泵头及溶剂管路除气泡及泵的启动。
3.2.1 接通系统电源，控制器开通后进行自检，数秒后通过，接受操作指令。
3.2.2 溶剂瓶脱气 打开四通道在线过滤器，脱气15min。
3.2.3 系统中气泡的排除 泵启动时，调节所需要的通道流速为1ml/min，该通道如A调节为100%。将抽液阀旋至draw位，用针筒抽A液10ml，将抽液阀旋至inject位，并推出针筒中的液体，将抽液阀旋至run位。此时参比阀排出的液体应连续，如不连续则重复以上抽液排液操作。重复以上操作分别抽取B，C，D液10ml。将流速减小至0.2ml/min，将参比阀关闭。柱前气泡如不能排除，则管路在不与色谱柱连接的情况下，提高流速至9ml/min，数分钟后将流速减至1ml/min。
3.3 等度（Isocratic）操作 按direct键，进入isocratic菜单。依次设定流路配比，氦气流速，柱温。设定方法如下：按光标移动键，至闪烁光标出现在所需设定位置上。用数字键设定数值，按enter键确认，注意每个流动相其组成之和应为100%，设定流速为0.1ml/min，逐渐增加流速至实验所需的流量，待系统平衡后开始实验。
3.4 梯度（Gradient）洗脱操作 梯度洗脱需要编制梯度表和程序事件（Program event）表，在OPERATE GRADIENT屏幕时运行。按program method键，进入梯度编辑窗口。移动光标键至table #处，输入数字键(1-15)，按enter键，将光标移至梯度表第一行，依次输入流速和流量配比，分别按enter键确认。光标移至第二行，依次输入梯度时间，流速，配比及曲线号(1-11)，重复以上操作，至梯度表全部编完，按显示屏对应功能键save，并记住table #。按Program event键，进入程序事件表的编制，移动光标键至table #处，输入数字键(1-15)，按enter键，将光标移至事件表第一行，依次输入事件号(1-10)和开关，按enter键确认，光标移至第二行，依次输入事件时间，事件号，和开关，按enter键确认，重复以上过程至事件表完成，按save键储存。
3.5 梯度程序的运行 按operate methods键，进入梯度方法运行窗口，将光标移至table处，输入欲运行的表号(1-15)，按显示屏对应功能键start run，运行。在设置时，如有疑问，可用HELP提示每个设置的含义。
3.6 实验结束 对泵进行冲洗后，关闭流量，注意流速必须要逐步变化。冲洗顺序:如果使用有缓冲液的流动相，则停泵前一定要用HPLC级纯水清洗HPLC系统。同时用清水清洗柱塞杆。若停泵存放时间超过一天，则停泵前还需用水/甲醇清洗系统。
3.7 关闭电源开关。
4 进样
4.1 采用7725i手动进样器，进样环（loop）体积为20μl，上样量在10~20μl时，进样体积必须大于loop体积的3-5倍，才能得到好的重现性，上样量小于10μl时，可以用10μl的微量进样器直接进样。进样后，快速旋转进样器的把柄，直接把样品进到色谱柱的柱头。
4.2 在做标准曲线时，进样浓度应由低到高。
5 信号检测及数据处理
5.1 本系统用996型二极管阵列检测器，波长范围在190-800nm，接受全波长光谱。在分析过程中测定吸收信号由计算机进行处理，显示色谱图或光谱图，列出数据处理结果。测量结束时按规定退出程序后关机。
5.2 点灯，指示灯亮。诊断，检查校准。状态灯点亮，处于准备状态。稳定1小时后可以用于采集数据。
5.3 常规准备工作  按色谱仪、检测器、打印机及计算机顺序接通电源。
5.4 进入Millennium32菜单，按Login，输入User Name and Pass Word后，按OK。
5.5 按Configure System进入子菜单，在建New chromatography System， 先删旧的，单击Project ，建New chromatography System，选择所需要的W600，及检测器（PDA or ELSD）,输入System Name，按Finish。
5.5 使用Run Sample窗口可采集处理和报告数据
5.5.1 从Millennium32 登录窗口，双击Run Sample。

5.5.2 从Run Sample 对话框，选择色谱系统并单击确定，将建立BusLAC/E连接。
5.5.3 从菜单条中选择Edit>New Method Set单击Yes。
5.5.4 单击New Create以创建新仪器方法。屏幕上显示Edit Instrument Method。单击各仪器。
以编辑仪器参数，然后选择File>Save As以命名、标记（约束应用环境）并保存方法。然后选择File>Exit。
5.5.5 出现Select Instrument Method对话框。选择刚刚创建的方法，然后单击Next。向导将提示用户输入适用于方法的信息。
5.5.6 Method Set Editor对话框将出现。核实信息，然后选择File> Exit。
5.5.7 在Run Sample对话框中，单击Sample选项卡，在样品表中输入样品信息。使用水平滚动条访问每行中的所有信息。
5.5.8 单击工具条上的 （Amounts），为各标准样品瓶输入组份名称和浓度。选择File> Exit，返回Run Sample。
5.5.9 核实运行模式是否设置成Run And Process或Run And Report。如有必要，使用下拉列表更改该条目。
5.5.10 选择File> Save Sample Set Method以保存方法。
5.5.11 使用Intrument Method下拉列表选择仪器方法。单击设置。
5.5.12 要收集数据，请单击工具条上的 （绿灯）。
5.6 使用处理向导创建处理方法
5.6.1 从Millennium32 登录窗口，双击Browse Project。选择要使用的Project
5.6.2 单击通道选项卡，然后单击工具条上的 （Review）。出现查看屏幕。
5.6.3 单击工具条上的 （Process Method Wizard），然后单击确定。从下拉列表中选择适当的处理类型，然后单击确定。向导将引导您逐步完成积分和校正参数的设置。
5.6.4     要在处理方法中输入某组份的多个浓度，或给它添加高级积分，请选择View> 处理方法布局
5.6.5 选择File>Save As> Method Set，将该处理方法保存为方法组的一部分。
5.7 查看结果
5.7.1 在Project窗口中，单击Result选项卡
5.7.2 加亮显示感兴趣的样品（未知样或标准样），然后单击Review图标。查看窗口显示色谱、保留时间和组份名称。
5.7.3 单击窗口底部状态条中的Peak选项卡，显示峰信息。对于PDA 数据，如果在处理方法中选择了Peak Purity和Library，则会显示此两者的信息。
5.7.4 要查看校正曲线，请选择Window> Calibration。
5.7.5 要查看结果的所有详细信息，请选择Window> Result。
5.7.6 要打印结果，请从Project窗口单击Result选项卡，然后选择要打印的结果。单击 （打印），选择所需报告，然后单击确定。