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主题：【第三届原创参赛】凯氏定氮法中关于量的研究

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发表于：2010/09/15 10:55:26 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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本文为sh101343原创作品，本作者是该作品唯一合法使用者，该作品暂不对外授权转载。
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凯氏定氮法中关于量的研究

海能仪器公司

众所周知，目前凯氏定氮法仍是蛋白质测定的最常用方法，通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。测定过程中检测人员常常对各个物质的投入量很模糊，不知道怎样确定合适的量关系，造成不确定的结果。下面根据测试经验和有关资料对凯氏定氮实验中各个量及其之间的关系作了研究和总结。本文从四方面入手研究。

一. 实验过程中量的关系确定

（一）凯氏定氮法：

1. 食品中样品：0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，

加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸。

2. 蒸馏加浓碱NaOH，加的量为H2SO4量的4倍

常量分析：≥80ml NaOH，25ml的2%硼酸，

半微量分析：例如10ml样品，10ml NaOH，  10ml 2%硼酸

3. 硼酸保持过量。

4.标准酸浓度：一般常量用0.1mol/L；半微量用0.05mol/L； 微量用0.01mol/L。

注：取样量的多少主要取决于试样的类型及待测元素含量的高低。


（二）一般推算过程：

[list=square]
  • 原料中大约含氮总量------（NH3）物质的量------硼酸量------耗标准酸浓度
  • 例如1： 4mg N----0.286mmol（NH3）---0.89ml的2%硼酸（5-10ml过量）-----0.05mol/L的标准盐酸滴定耗约5.7ml
  • 例如2: 40mg N----2.86mmol（NH3）---8.9ml的2%硼酸（20-25ml过量）-----0.1mol/L 的标准盐酸滴定耗约28.6ml
  • 注：一般过量1/3
  • 有资料中提到，10g/L硼酸溶液可最多吸收氮量为0.46mg，也可以此粗略计算需要硼酸量

    （三）常用量参考资料



    二、蒸馏时间与蒸馏量

  • 常量一般是在接收液收集到150-200毫升,就可以了,用试纸查接收液显中性也行。
  • 用凯氏定氮仪, 就可以设定自动接收至150ml就可以了。
  • 微量蒸出50ml可完全蒸出。
  • 一般蒸馏5min完全蒸出氨。
  • 实际上，蒸馏过程中前两分钟大约80%的氮被蒸出。

    三、标准酸浓度的确定

    在滴定分析中，不论采用何种滴定方式都离不开标准溶液，否则无法计算分析结果。所谓标准溶液是一种已知准确浓度的溶液。

    标准溶液越浓，它所含的起作用物质浓度越大，所以最后滴加标准溶液使指示剂所发生的颜色变化也较明显，但标准溶液越浓，则由一滴或半滴过量所造成的误差越大。

    确定标准溶液浓度依据以下几点：

    [list=square]
  • 1.  测量标准溶液体积的相对误差[list=square]
  • 一般滴定分析方法误差小于1‰，一次滴定，对滴定管有两次读数。
  • （1）常量分析，读数误差为±0.02mL，一般滴定分析方法误差小于1‰，为了使读滴定管的误差小于1‰，所用标准溶液的体积不小于20.00mL，因为（±0.02/20.00）×100%=±0.1‰；若方法误差的误差大。标准溶液的体积可小些。[list=square]
  • （2） 如果使用半微量滴定管，其最小刻度为0.01ml，可以估计到0.001ml，为使相对误差小于0.1%则应使滴定剂消耗在2-3ml。
  •   可以通过调整试样的称样量或试液的稀释倍数、滴定剂的浓度等， 使滴定时滴定剂的消耗量恰在所希望的范围之内。
  • 2.  分析试样中被测成分的含量和性质
  • 若被测物质的含量低，就应使用较稀的标准溶液，以使每次滴定消耗滴定剂的体积不小于20mL，而最好保持体积在30mL左右，以减小误差。微量测定消耗体积不小于3ml，定量分析常用标准溶液浓度为0.05-0.2mol/L。
  • 3.对分析结果准确度的要求
  • 对分析结果准确度的要求高，则标准浓度应稀一点。
  • 在酸碱滴定中，标准溶液均用强酸或强碱，而不用弱酸或弱碱。
  • 一般常用的标准溶液浓度0.1mol·L－1

    滴定分析时，试样及基准物质的质量常用分析天平称量。一般分析天平的称量误差为±0.0002g，若要求测量时相对误差在0.1%以下，则





    因此，为了减小称量时的误差，试样或基准物质的质量必须在0.2g以上。

    应该指出不同的分析工作要求有不同的准确度，所以应根据具体要求，控制各测量步骤的误差，使之能适应各种不同分析工作的要求。

    四、常量、微量测定

    1. 根据样品量分析

    [td=1,1,189]

    2. 根据被测组分的百分含量分类


    由此可知：常量、半微量和微量分析并不是表示被测组分的百分含量，而是根据试样的用量进行分类。通常用常量和半微量的分析方法。

    3. 凯氏定氮法常量、微量测定

  • 常量法与微量凯氏定氮法不同点：加入硼酸量有25 ml →10 ml, 滴定用盐酸浓度由0.1 mol/L → 0.05 mol/L 。
    以上仅是个人工作过程中的一些总结，与大家共同探讨。[/td]
    • 附件：
    凯式定氮中量的研究.doc
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    2010/9/15 21:43:21 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    三聚氰胺能区分出来不？
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    abcdefghijkl123
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    2010/9/16 0:04:52 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    三聚氰胺当然是区分不出来的
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    天涯就是天地
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    2010/9/16 0:24:04 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    你能上点图片就好了。
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    chemzgz
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    2010/9/16 13:59:33 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    原文由 天涯就是天地(tianyamzn) 发表:
    你能上点图片就好了。

    需要上哪一类的图片呢？
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    chemzgz
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    2010/9/16 14:02:25 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    原文由 小鸟也飞翔(tonyding) 发表:
    三聚氰胺能区分出来不？

    不过，这种方法能测非蛋白氮的含量。先用三氯乙酸沉淀蛋白质再用凯氏定氮法测出非蛋白氮的含量，同时也得出了真蛋白的含量。
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    weihaiyun
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    2010/9/16 21:55:32 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    马上要做，先看看
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    chemzgz
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    2010/9/21 16:46:03 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    消化过程中浓碱加少，中途停止再添加对结果有影响吗？哪位朋友做过？
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    消咳喘
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    2010/10/7 16:47:39 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    原文由 小鸟也飞翔(tonyding) 发表:
    三聚氰胺能区分出来不？

    这个不可能吧！
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    dadaguai
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    2010/12/21 22:34:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    楼主，你好！我需要测底泥中的总氮，参考土壤总氮的测量，国标上用的是半微量开氏法，但我现在只能买到全套的微量定氮蒸馏装置，是否可以用呢？按照你的说明，改变用量就可以了么？
    希望你能上几张蒸馏装置的图，是否可以自己搭一个呢？
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    青林
    wyqql2060
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    2010/12/21 22:40:41 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
    这个方法很烦的,一天做不了几批!
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