1 高效
液相色谱(HPLC)的基本原理
高效
液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)是在经典
液相色谱法的基础上,于20 世纪60 年代后期迅速发展起来的。由于检测过程中需用高压输送流动相,故又称高压
液相色谱法(high pressure liquid chromatography,HPLC);又因分析速度快而称为高速
液相色谱法(high speed liquid chromatography,HSLC),也称现代
液相色谱。
HPLC 法的基本原理是将经过提纯的试样用微量进样器注入加样系统, 起动高压泵, 试样被流动相带入色谱柱内,在一定高压下,样品在色谱柱内的填料固定相(与流相)之间经过无数次的交换,并按物质在两者之间的分配系数、分子极性的大小以及所带电荷数的多少等进行分离,通过检测器检测, 根据峰高或峰面积精确地计算出所测物质的含量。
2 高效
液相色谱(HPLC)技术的特点
2.1 分离效率高 可以使多种性质不同的几种组分同时得到较好的分离,例如样品中的17种氨基酸可以一次进样并能较好的分离。
2.2 分析速度快 一般在几分钟到几十分钟就可以完成一次复杂样品的分离和测定。
2.3 样品用量少 如氨基酸测定进样量10-25ml,溶剂的消耗也很少。
2.4 灵敏度高 如紫外检测器的最小检测量可达10-9g或更低,荧光检测器的最小检测量可达10-11g。
2.5 应用范围广 几乎可用于所有化合物。
2.6 自动化程度高 它不仅分离和测定一次完成,而且可连续完成99个样品测定,只要程序设定,不需操作人员监控