主题：【讨论】色谱峰拖尾

原文由 kqz793360(kqz793360) 发表:
我现在做一分子量3464等电点10.9的多肽。纯度测定方法是参考国内一家企业的方法。  色谱条件如下

流速：1.0ml/分钟，上样量：40μl（0.5mg/ml浓度），柱温：50℃，检测波长：210nm，样品池温度：4℃，流动相A:<SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Times New=" New? Roman?,?serif?;"FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 宋体;" New?"New" Roman?;>硫酸铵水溶液（<SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Times New=" New? Roman?,?serif?;"FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Times New=" New? Roman?,?serif?;"urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />50mM<SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 宋体;" New?"New" Roman?;>硫酸铵<SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Times New=" New? Roman?,?serif?;"FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 宋体;" New?"New" Roman?;>乙腈溶液

洗脱梯度见表

时间（min）	A（%）	B（%）
0	71.5	28.5
30	69.5	30.5
56	46.0	54.0
57	71.5	28.5
70	71.5	28.5

样品主峰拖尾，对称因子1.6。目前我用的色谱柱式4.6*150mm,上样量20ug并不大，色谱柱也是新的，所以这些原因都可以排除。我怀疑是我们缓冲体系不对，我还是搞不懂缓冲盐在这里具体起什么作用？我今天在<SPAN style="FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 'Times New=" New? Roman?,?serif?;"FONT-SIZE: 10.5pt; LINE-HEIGHT: 150%; FONT-FAMILY: 宋体;" New?"New" Roman?;>硫酸铵水溶液中加入10mM三乙胺没有得到改善，后增加至20mM拖尾一点都没改善。到底是什么问题呀？请各位帮忙啊。

原文由 瓜瓜(dunedsy) 发表:
所使用的柱型是否正确呢?我指的是填料.

原文由 kqz793360(kqz793360) 发表:
我现在做一分子量3464等电点10.9的多肽。纯度测定方法是参考国内一家企业的方法。  色谱条件如下

流速：1.0ml/分钟，上样量：40μl（0.5mg/ml浓度），柱温：50℃，检测波长：210nm，样品池温度：4℃，流动相A:硫酸铵水溶液，
流动相B：乙腈溶液

洗脱梯度见表

时间（min）	A（%）	B（%）
0	71.5	28.5
30	69.5	30.5
56	46.0	54.0
57	71.5	28.5
70	71.5	28.5

样品主峰拖尾，对称因子1.6。目前我用的色谱柱式4.6*150mm,上样量20ug并不大，色谱柱也是新的，所以这些原因都可以排除。我怀疑是我们缓冲体系不对，我还是搞不懂缓冲盐在这里具体起什么作用？我今天在硫酸铵水溶液中加入10mM三乙胺没有得到改善，后增加至20mM拖尾一点都没改善。到底是什么问题呀？请各位帮忙啊。