烯酰吗啉检测方法
1.分析目标化合物
烯酰吗啉(E体) 烯酰吗啉(Z体)
2.仪器设备
带紫外分光光度检测器的高效
液相色谱仪和
液相色谱--质谱仪。
3.试剂
硝酸银硅酸镁: 在含水5(w/w%)的柱色谱用合成硅酸镁中,按5(w/w%)加入粉碎的硝酸银,充分混合。用时配制。
4.标准品
烯酰吗啉(E体及Z体):含烯酰吗啉(E体及Z体)98%以上,熔点为127℃~148℃
5.试验溶液的制备
a 提取方法
①水果和蔬菜(葱除外):准确称取约1kg样品,必要时定量加入适量水,搅碎混合均匀后,称取相当于20.0g样品的量。
加入100mL丙酮,搅拌3分钟后,用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物,加入50mL丙酮,搅拌3分钟后,按上述同样操作,合并滤液于减压浓缩器中,40℃以下浓缩至约30mL。
将其移入预先注入100mL 10%氯化钠溶液的300mL分液漏斗中。用100mL乙酸乙酯:正己烷(1:1)混合溶液洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶,合并洗液于上述分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后,静置,乙酸乙酯和正己烷层移入300mL三角瓶中。水层中加入50mL乙酸乙酯:正己烷(1:1)混合溶液,按上述同样操作。合并乙酸乙酯和正己烷层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠,不时振荡、混合,放置15分钟后,滤入磨口减压浓缩器中。再用20mL乙酸乙酯:正己烷(1:1)混合溶液洗涤上述三角瓶,以此洗涤液洗涤滤纸上的残留,重复操作二次。合并两洗涤液于上述减压浓缩器中,40℃以下除去乙酸乙酯和正己烷。残留物中加入10mL丙酮:正己烷(3:17)混合溶液溶解。
②葱:与①同样操作,残留物中加入10mL乙醚:正己烷(1:1)混合溶液溶解。
b 净化方法
② 水果和蔬菜(葱除外):
(I)合成硅酸镁柱色谱法
在内径15mm、长300mm色谱管中注入5g悬浮在正已烷中的柱色谱用合成硅酸镁,其上面再装入约5g无水硫酸钠,放出正已烷至柱上端留有少量正已烷。柱中注入a 提取方法之①所得的溶液后,注入90mL丙酮:正已烷(3:17)混合溶液,弃去流出液。再注入100mL丙酮:正已烷(3:7)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去丙酮和正已烷。残留物中加入1.5mL甲醇溶解,加3.5mL水。
(II) 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中注入10mL乙醇,弃去流出液。再注入10mL水,弃去流出液。柱中注入b 净化方法中①之(I)所得的溶液后,注入15mL水:乙醇(7:3)混合溶液,弃去流出液。注入10 mL乙腈:水(1:1)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去乙腈和水。残留物中加入水:乙醇 (1:1) 混合溶液溶解。准确至5mL,此为试验溶液。
②葱
(I)硝酸银硅酸镁柱色谱法
在内径15mm、长300mm色谱管中注入5g悬浮在正已烷中的硝酸银硅酸镁,其上面再装入约5g无水硫酸钠,放出正已烷至柱上端留有少量正已烷。柱中注入a 提取方法之②所得的溶液后,注入90mL乙醚:正已烷(1:1)混合溶液,弃去流出液。再注入100mL丙酮:正已烷(3:7)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去丙酮和正已烷。残留物中加入2mL丙酮:正已烷(1:19)混合溶液溶解。
(II)酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱(500mg)中注入10mL丙酮:正已烷(1:19)混合溶液,弃去流出液。再注入10mL正已烷,弃去流出液。柱中注入b 净化方法中②之 (I) 所得的溶液后,注入8mL丙酮:正已烷(1:19)混合液,弃去流出液。再注入10mL丙酮:正已烷(1:9)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去丙酮和正已烷。残留物中加入1.5mL甲醇溶解,加入3.5mL水。
(III)十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中注入10mL甲醇,弃去流出液。再注入10mL水,弃去流出液。柱中注入b 净化方法中②之(II)所得的溶液后,注入15mL水:甲醇(7:3)混合溶液,弃去流出液。再注入10mL乙腈:水(1:1)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,40℃以下除去乙腈和水。残留物中加入甲醇:水(1:1)混合溶液溶解,准确至5mL,此为试验溶液。
6.操作方法
a 定性试验
按下列操作条件进行试验,试验结果必须与标准品的一致。
操作条件
柱填充剂:十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒径5μm)
柱:内径4.6mm、长250mm 不锈钢管。
柱温: 40℃
检测器:波长250nm
流动相:水:甲醇(2:3)混合溶液。调整流速使烯酰吗啉(E体)约10分钟流出。烯酰吗啉(Z体)12分钟流出。
b 定量试验
按标准品上所记载的组成比例制作成烯酰吗啉(E体)和烯酰吗啉(Z体)的标准曲线,根据与a 定性试验相同试验条件所得的试验结果,峰高法或峰面积法定量。
c 确证试验
按照与a 定性试验相同的试验条件,用
液相色谱--质谱仪测定。试验结果必须与标准品的一致。此外,必要时用峰高法或峰面积法进行定量。
7.定量限
0.01 mg/kg
8.注意事项
1) 分析值
烯酰吗啉(E体)和烯酰吗啉(Z体)之和为烯酰吗啉的分析值。
2)烯酰吗啉的标准为E体和Z体的混合物。分别用E 体和Z体的峰面积(或峰高)之和制作标准曲线。