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主题：【求助】请教：样品的峰面积检测出现问题了？

浏览0 回复4 电梯直达
feixiang3152
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发表于：2010/12/01 11:30:25 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
求助，面积归一法，拖尾因子大，峰面变异系数大。

本人所做实验为一种大分子的病毒蛋白的纯度测定（面积归一法）。采用的分子排阻色谱柱，病毒蛋白浓度在10ug/ml左右，流动相为1mM PB，进样量50ul。 现在的问题是目的峰拖尾因子太大，2.3左右； 另外连续进针，样品的峰面积变异系数7%左右，不同天的变异系数更大。

本人新手，恳求各位有经验的大虾多多指教讨论，有可能是什么原因以及有什么办法能解决。
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2010/12/1 11:43:52 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法是自己建立的吗？进样量有没有使用满定量？
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feixiang3152
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2010/12/1 14:39:19 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法为自己建立的新方法。 什么叫满定量？ 是指超过柱载或检测限吗？ 如果是的话那没有超的，因为体积也是我试过不同体积后确定下来的，有试过100ul，没有问题的。  自动进样器，刚做过检测，没问题。
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feixiang3152
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2010/12/4 22:06:24 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我样品浓度已经很低了 大约在10ug/ml左右 峰高才2.5mV 还需要再降低吗？

流动相为1mM PB是，1mM PB是浓度为1m mol/L的 磷酸盐缓冲液
仪器的系统适应性实验怎么做？

请教大家！！
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有水有渝
xky0230699
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2010/12/5 11:23:52 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把磷酸盐缓冲液的浓度提高到50m mol/L试试，仪器的系统适应性只要你的所要成分完全分离，分离度达到1.5以上，理论塔板数达到要求，一般3000-5000以上就行，系统适应性检测浓度一般选择较低浓度，你的峰高才2.5mV ，就用这个浓度就行了。
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