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液相色谱（LC）

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主题：【求助】做盐酸头孢替安有关物质检查时，液相色谱峰出峰很前沿，该选用什么样的色谱柱呢。

浏览0 回复17 电梯直达

chen168168

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发表于：2010/12/07 14:33:15 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最近很苦恼，之前用了大连依利特的C18 hypersil 4.6*250mm 5ul 进行盐酸头孢替安有关的质的方法检测，当时参照的方法是《美国药典USP28》盐酸头孢替安含量测定项下的色谱条件，做方法学时，色谱峰均很对称，分离度也完全符合要求，做专属性（破坏）时主峰与相邻的色谱峰也均分离完好。

可最近换了大连依利特其它的新柱时（填料 hypersil，及ODS-BP）均出现很前沿的色谱峰，换了其它的仪器也出现相同的情况，后来我又用了色谱柱inertsil –ODS3 ,inertsil –ODS-BP, pheaomenex-Gemini 进行试验，可依是出很大前沿峰。

正常峰（加热破坏，色谱柱为依利特：ODS2 hypersil 4.6*250mm,5ul)

拖尾因子1.002 理论板数5454.2 色谱柱为2005年左右购进的。

不正常峰

色谱柱依利特hypersil ,ODS-BP
色谱柱inertsil –ODS3 inertsil –ODS-BP,

色谱柱pheaomenex-Gemini

色谱柱均为2009年新购进。

峰形明显的前沿，峰高明显的变小，峰面积不变，峰拖尾因子达到0.5左右，理论板楼才400左右

知道论坛里老师多，出现这样的情况到底是什么原因呢？不知道该该用什么牌子，什么样的填料也能满足我当前的试验条件。

或许有老师也做过这个品种，用了与我相当的色谱条件，请你帮的忙，指点一下。

或许，这里有老师也出现过与我相同或相类似的情况，请你帮的忙，指点一下。

或许，你的经验能帮到我，请你帮的忙，指点一下。

相信这里有很多，很多的热心朋友们。

小女子将非常感激。

我选用的色谱条件

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以硫酸铵溶液（13.6g，加水880ml溶解，用2mol/L氨水调节p H6.5）-乙腈=（880：120）为流动相；检测波长为254nm。取分离溶液20ul,注入液相色谱仪,去四唑头孢替安峰对头孢替安峰的保留时间约为0.6,去四唑头孢替安峰与头孢替安峰的分离度应大于4.0.取下述对照品溶液20ul,注入液相色谱仪,理论板数按头孢替安峰计算不得低于2000,拖尾因子不得大于1.8。

取本品，精密称取适量（约含头孢替安50mg），置100ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（应临用新配）。精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液（临用新配）。照含量测定项下的方法试验，精密量取对照溶液20ml，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10%～25%。精密量取供试品溶液和对照溶液各20ml，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积的1倍（1.0%），各杂质峰面积总和不得大于对照溶液的主峰面积的3倍（3.0%）。

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2010/12/7 16:59:26 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

出峰时间早，可以调调你的流动相

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chen168168

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2010/12/7 19:12:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我调过了呢，可还是很前沿。

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有水有渝

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2010/12/7 19:34:00 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你确定不是样品及其溶剂，流动相的问题吗，PH调节是否到位，PH计校正过没有？

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chen168168

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2010/12/7 19:39:51 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

样品及其溶剂，流动相我都重复做过很多次了呢，PH调节也分别用过二台不同厂家的PH计调过，之前做方法学的那根柱子做是不问题的，但是一换了其它的柱子做就很前沿。
现在是我以前用做方法学的那根柱子用了几个月了，有些拖尾了，所以才想换新的柱子，但是老出现前沿这样的情况，我都不知道该怎么办好。

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sacid

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2010/12/8 12:30:04 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我建议你换柱子吧。国产的柱子都存在重复性差的问题，这个我不是听一个两个人说了，我自己也深有体会。
柱子的问题，你再调节流动相，恐怕也不行哦。

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chen168168

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2010/12/8 16:13:02 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢，最近想换柱子，但不知道该换什么牌子的好，当时看了日本填料，国内分装的色谱柱inertsil –ODS3 介绍，碳含量比普通的色谱柱要高，适合抗生素的分析，试了一下还是不行。

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北方海盗

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2010/12/8 16:27:27 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱峰前伸，原因很多：在不更换色谱柱的情况下，可能温度过低，或色谱柱本身损坏；在更换色谱柱的情况下，可能就是流动相选择不当，每种C18色谱柱，其C18填料有差异，例如碳载率，键合相官能团，颗粒粒度分布，孔体积大小等都不一样，例如ODS2和ODS就不完全一样，因此这时你需要适当调整流动相比例，色谱峰效果就会好。国产色谱柱质量不错，价格合理。欢迎致电大连依利特。

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chen168168

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2010/12/8 17:17:04 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 北方海盗(herozxq) 发表:
色谱峰前伸，原因很多：在不更换色谱柱的情况下，可能温度过低，或色谱柱本身损坏；在更换色谱柱的情况下，可能就是流动相选择不当，每种C18色谱柱，其C18填料有差异，例如碳载率，键合相官能团，颗粒粒度分布，孔体积大小等都不一样，例如ODS2和ODS就不完全一样，因此这时你需要适当调整流动相比例，色谱峰效果就会好。国产色谱柱质量不错，价格合理。欢迎致电大连依利特。

----谢谢，楼上的依利特老师，我用大连依利特的色谱柱好几年，至今试验室也常用，对于色谱柱，我想可能是当初做方法时自己没去考虑到方法的耐受性，多用几根不同厂家的柱子试试。所以弄得自己现在很被动，如果要把整的试验推翻从来，那要花很多的时间和精力，所以我还是希望能通过选择柱子解决我的问题。
另外，我试过，升温至40度试，可还是不行，我选用的方法是美国药典的方法，也有很多文献用与我相同的方法，可我怎么就出现这样的情况呢。唯有一点不同的是美国药典使用了1.5ml的流速，我用1.0ml的流速，我想应该不为差异这么大的。

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