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主题：【求助】HPLC测定样品 出现问题了？怎么办？？

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dhd9f97
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发表于：2011/04/29 10:48:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
EDTA铁的液相检测问题
采用液相检测EDTA铁，保留时间不稳定，第一天6.6分，第二天10分，第三天3分，第四天10分

保留时间跟我玩起来捉迷藏有戏，请大家多多指教。以下是详细内容。

柱子 Agilent XDB C8

流动相：40%四丁基氢氧化铵溶液3.25ml加水130ml，再用8.8%甲酸溶液调PH至3.30，加甲醇125ml，再用水稀释至1000ml
，此时PH约为3.50

液相条件 波长254nm ，流速1.0ml/min进样量20  EDTA铁浓度0.1mg/ML

第一天：保留时间6.6 分，没在意

第二天：使用前一天流动相、柱子，保留时间跑到10分，以为是EDTA铁在新使用的柱子上有一定饱和时限，所以勉强解释了一下，希望以后会稳定。继续试验

第三天：新换流动相，柱子未换，保留时间跑到3分，以为甲醇加多了或者试剂的问题，狂配流动相，连续更换3次流动相，样品保留时间均在3分。
放弃，无语了。

第四天：死马当活马医，继续用前一天的柱子，流动相，前一天的样品，保留时间重新回到了10分。

以上样品在四天检测当中，峰形和峰面积没有明显变化。

分析以上：排除了流动相、样品、柱子、仪器的因素，实在找不出原因了。还怀疑是流动相的PH导致样品不稳定，后来查询了EDTA铁的PKA在pKPK1=0.0 (CO2H)
pK2=1.5 (CO2H)
pK3=2.00 (CO2H)
pK4=2.69 (CO2H)
pK5=6.13 (NH+)
pK6=10.37 (NH+)  来自维基百科

EDTA铁为二元酸  PKA为2.00 依据此 在PH3.5 是稳定的 

为什么呢？ 不过从目前来看，好像是流动相PH的原因啊
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2011/4/29 11:55:51 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
每次检测完毕后色谱柱充分清洗了吗，流动相的PH是否调节到位？
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zhao1025
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2011/4/29 15:29:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
貌似没有提到柱温，你柱温控制了吗？
不清楚 该物质对温度的敏感性。
有些物质柱温变化，保留时间随之变化很明显
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yankunsu
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2011/4/29 15:46:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
40%四丁基氢氧化铵是离子对试剂，需要平衡的时间较长，再者样品处理是否完全一致？是否一个用流动相，一个用水
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tanninghui6000
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2011/4/29 16:42:06 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱温问影响这么大？
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dhd9f97
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2011/5/3 14:57:49 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的热心帮助

1 柱温一直是室温  这几天的温度变化也不大

2 溶解样品的试剂 是水 ，样品处理是一致的。难道跟这个有关系？

谢谢不吝赐教
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