10cm2),直接或处理后接种,经增菌分离培养后,进行革兰氏染色、生化试验与血清凝集试验项检查。
4.11.1 大肠杆菌(Escherichia coli) 取胆盐乳糖培养基3份,每份各100ml,2份分别加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌液作阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀释剂作空白对照。培养18~24小时(必要可延至48小时)。空白对照应无菌生长。其余2份培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板,培养18~24小时。当阳性对照的平板呈阳性菌落时,供试品的平板无菌落生长,或有菌落但不同于表1所列的特征,可判为未检出大肠杆菌。
表 1 大肠杆菌菌落形态特征
培 养 基 菌 落 形 态
曙红亚甲蓝琼脂 呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心深紫色或无明显暗色中心,圆形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑,湿润,常有金属光泽。
麦 康 凯 琼 脂 鲜桃红色或微红色,菌落中心深桃红色,圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润。
如生长的菌落与表1所列特征相符或疑似者,应挑选2~3个菌落分别接种于营养琼脂培养基斜面,培养18小时,作以下检查:
4.11.1.1革兰氏染色 取上述斜面培养物,涂片,固定。以结晶紫染液染色1分钟,水洗,革兰氏碘液媒染1分钟,水洗,滤纸吸干余水。以乙醇脱色20~30秒钟,水洗。滴加沙黄染液复染1分钟,待干后镜检。
4.11.1.2乳糖发酵试验 取上述斜面培养物,接种于乳糖发酵管,培养24~48小时,观察产酸(培养基变色),产气(杜氏管内有气泡)。
4.11.1.3靛基质试验 取上述斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,培养48±2小时,沿管壁加入对靛基质试液0.3~0.5ml,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。
4.11.1.4甲基红试验 取上述斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,培养48±2小时,于每1ml培养液中加入甲基红指示剂1滴,立即观察,呈