快速导航采购仪器提醒

厂商论坛

版主:

入住本版

专家:

仪器信息网

居民列表

仪器社区 > 特色服务 > 厂商论坛帖子详情

快速回复发表新帖最新帖

主题：【分享】HPLC技术知识共享（所有内容已整理好并添加到附件）

浏览0 回复12 电梯直达

Eda

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2011/12/16 11:36:02 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有部分网友觉得样品前处理技术知识小百科挺不错的，作为发帖人的我甚是开心，决定继续资源共享了，大家注意了，现在开始更新HPLC技术知识了，觉得有用的朋友们赶紧收藏了

，所有内容已整理好并添加到附件，有需要的同学可以下载查看了哦

1 怎样选择色谱柱

现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

一、硅胶基质填料

1、正相色谱

正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基(NH2)和氰基（CN）键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（MethyleneChloride）等。

2、反相色谱

反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

二、聚合物填料

聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。

相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

三、其他无机填料

其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

怎样选择填料粒度

目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

附件：

HPLC知识.pdf

0
赞贴
12
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

您可能想找: 液相色谱(LC) 询底价

选参数看心得找厂商查方案

专属顾问快速对接

立即提交

相关阅读

Eda

禁止发帖修改昵称

ID：diamonsil-girl

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/12/16 11:41:17 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

顶起

赞贴

拍砖

wangruiting

禁止发帖修改昵称

ID：wangruiting

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/12/16 14:22:51 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

顶期待继续更新

赞贴

拍砖

1818

禁止发帖修改昵称

ID：xyhdcm2002

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/12/16 15:04:27 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

学习了，看来选择色谱柱还是很深的学问

赞贴

拍砖

Eda

禁止发帖修改昵称

ID：diamonsil-girl

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/12/19 9:09:08 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2 常见保护柱漏液原因

1、柱芯放置不当。由于保护柱套内部空间略大于柱芯体积，因此柱芯在放置过程中可能略微倾斜，从而导致保护柱漏液，可通过多次重新放置柱芯解决。
2、柱套未拧紧。部分用户习惯用手将柱套拧紧后就开始使用，而实际上此时保护柱并未完全拧紧，用扳手继续拧紧保护柱套约1/4圈，即可将保护柱拧紧，不再漏液。

赞贴

拍砖

2011/12/19 9:10:18 Last edit by diamonsil-girl