主题：【讨论】酰胺类化合物的液相检测遇到的问题讨论--高手进

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原文由 yingchunzh(yingchunzh) 发表:
首先建议楼主整理一下思路：既然你发现了碱性系统峰型很好，恭喜你，你已经初步摸索除了流动相的类型，按着这个思路走，确定最后流动相就好了，此时，不要纠结于残留的问题，因为这和你流动相摸索就是两码事，残留的问题应该从化合物的类型、色谱柱的类型等方面去考虑。比如：你用的什么色谱柱？是否真的能承受9以上的碱性体系，不要相信广告哦。

残留问题，就是碱性系统中根本问题，目前还没找到很好的办法避免，当然这可能也与化合物的性质有关，因为其他一些化合物在碱性条件下，残留没那么大的。
其实能承受PH9以上的色谱柱本身就不多的，选择空间本身就不大。有些柱子虽然短期能够承受高PH，但实际上本身已经对其产生负面作用。正常碱性条件下，我们使用的是Phenomenex Gemini C18 4.6*50mm 5μm，这款柱子理论上和实际上都是行得通的。而这Phenomenex Kinetex  C18 50*2.1 mm,2.6 μm柱子，说明书上是可以的，不过 实际上也就走个几百针，柱效就下来了，尤其是在高柱温下。

事实上，有些碱性条件看起来是可行的，实际操作中，可能因为这样那样的原因，可能还是无法行得通。碱性条件下，即使换柱子，调梯度，都是没有效果的。

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
建议试试酸性条件，pH2.2左右，0.1％磷酸正好，起始比例从100％水开始，waters的XTerra柱子正好。
中性或弱酸性不足以抑制硅羟基。
碱性条件一是柱子寿命受影响，即便是目前很多号称可以到pH到12的柱子也不好；其次，碱性条件经常靠流动相添加氨水得到，这样的基线重复性通常很差。

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建议试试酸性条件，pH2.2左右，0.1％磷酸正好，起始比例从100％水开始，waters的XTerra柱子正好。
中性或弱酸性不足以抑制硅羟基。
碱性条件一是柱子寿命受影响，即便是目前很多号称可以到pH到12的柱子也不好；其次，碱性条件经常靠流动相添加氨水得到，这样的基线重复性通常很差。

呵呵，质谱不能用磷酸类流动性的，这些算不易挥发，对质谱污染严重。0.1%的FA in water流动性倒是可以用，但由于化合物呈现留在状态在色谱柱上不易保留，从而导致和杂质的分离度不高，后来使用了阳性离子对试剂，才完成实验。一位老师给出的解释我贴出来和大家共享下：
目标物上的N原子结合质子带上正电荷，这样极性增大，因而在反相柱没有较好的保留效果，因而峰型变差；而在碱性流动相条件下具有较好的峰型原因是：碱性条件抑制了N原子结合质子的能力，因而目标物以分子形式存在，使得在分离过程中能够得到较好的峰型。但由于硅羟基的次级保留作用导致目标物的残留比较大，所以这些目标物适合在酸性条件下加阳离子对试剂分离。