四、试剂
1.丙烯酰胺
2.甲叉双丙烯酰胺
3.两性电解质
Ampholine(40%,pH3.5~9.5)
4.过硫酸胺(催化剂)
5.TEMED(四甲基乙二胺)(加速剂)
6.磷酸
7.NaOH
8.三氯乙酸(TCA)
五、溶液配制
1.丙烯酰胺贮液(30%丙烯酰胺,交联度2.6%):,30g丙烯酰胺和0.8g甲叉双丙烯酰胺溶于H2O,定容至100ml,滤去不溶物后存于棕色瓶,4℃可保存数月。(全班公用)(另一配方为29.1g 丙烯酰胺和0.9g 甲叉双丙烯酰胺溶于H2O,定容至100ml,交联度为
3.0%)。
2.两性电解质Amphline(40%)的加入量为:50ml /ml 胶液。
3.过硫酸胺:配成1mg/ml的浓度,当天配制,配100ml全班公用。胶液中的加入量为0.5mg/ml胶液。
4.TEMED:胶液中的加入量为1ml/ml胶液。
5.蛋白质样品:选用两种等电点相差较大的蛋白质,每根垂直管中每种蛋白质的加样量控制在<100mg。蛋白质样品配制成各为5mg/ml的浓度。配2.5ml全班公用。
6.固定液:10%的三氯乙酸,每组配50ml 。
7.阳极电极液:0.1M H3PO4
3.4ml 浓磷酸(85%)加H2O至500ml,每个电泳槽用500ml。
8.阴极电极液:0.5M NaOH
2g NaOH 加H2O溶解至500ml,每个电泳槽用500ml。