主题：改善酸峰形的四种途径

改善酸峰形的四种途径


    色谱工作者时常对碱性化合物拖尾(峰形差)的现象比较熟悉。这种现象通常是由于碱性化合物中的碱性氮原子与固定相中酸性硅醇基的相互作用而至。分析者通常使用加入三乙胺的办法来减少拖尾现象的发生。酸性物质峰形差的现象不多见，但同样给分析结果造成不良影响。下文以布洛芬(对异丁基苯异丙酸)的分析为例，介绍几种改善峰形的方法。
    1. 增加流动相中盐的浓度。 分析布洛芬的一种方法是使用60∶40(v/v)的乙腈-5mM磷酸二氢钠。图1(a)中是使用此流 动相所得色谱图，拖尾因子高达(Tf)3.9。高盐浓度(如，25-50mm)磷酸盐可改善酸性物 质的峰形，原因是高盐可抑制溶质与硅胶的离子化以及二者之间的第二相互作用。本例中，分析者应注意分析方法本身及所分析溶质。布洛芬的酸性官能团-羧基(见图1a)的 pka4.4。5mM磷酸二氢钠的pH也是4.4，此pH在磷酸盐的缓冲范围之外(1.1-3.1)。因此， pH4.4时，布洛芬的羧基刚好达到解离平衡(离子化状态与非离子化状态共存)。羧基 (特别是离子化状态羧基)可发生离子交换作用或与硅胶表面的质子竞争，导致拖尾或增加保留。为降低这些相互作用，分析者必须使流动相的pH值远离样品的pka值。
 
    2. 降低流动相的pH值。 将流动相的pH值降低到3.0，峰形得以改善(见图1b)。pH3.0拖尾因子高达(Tf)3.9时，在流动相缓冲范围内，但缓冲能力较低。使盐浓度增加到大于20mM可改善色谱重现性，也能改善峰形。此时布洛芬的羧基不同于pH4.4时的离子化与非离子化混合状态，而 处于单一质子化状态。质子化状态时羧基与硅胶表面质子化的硅醇基相互作用的可能性就小得多。因此，低pH值与盐条件下，布洛芬的拖尾因子降至1.8(图1b)。此结果表明，第二种相互作用已被降低，但尚未消除。另外一种改善峰形的办法及使用添加剂。
   
    3. 加入竞争有机酸。 与加入三乙胺抑制碱性化合物拖尾原理相似，有机酸可与酸性样品组分竞争硅胶表面的活性位置。在流动相中加入1%乙酸对峰形的改善可见图1c，其中得到了对称的布洛芬峰，拖尾因子为1.0。流动相也可再作改变以期获得所希望的结果。

    4. 使用另一种有机酸- 0.1%三氟乙酸。 较高浓度的乙酸会产生较高的基线噪音(图1c)。使用0.1%三氟乙酸(约13mM) 取代乙 酸及磷酸盐，使流动相更为简单，仍可获得非常对称的布洛芬峰(图1d)。除此之外，这一流动相还改善了UV透过性，满足了LC-MS的挥发性需要。