原文由 peter2006(peter2006) 发表:
同问,waters MSE 具体是个什么过程?AB的SWATH又是怎么样的一个过程?
我了解的waters MSe:假如waters的QTOF最大的扫描速度是20Hz,那么扫描时间最小也就是0.05S(1/20=0.05)。
当我们设定一个MSe方法扫描时间设定为0.1秒钟时,其中0.05S用于MS扫描,下一个0.05S用于MS/MS扫描,然后循环......(当然中间还有inter scan delay,lockspray snan time等,在此我们忽略这些次要因素),这样就在计算机的处理下,形成了两个数据通道,即低能量通道和高能量通道。这种办法是针对全质量范围的。不知道我的理解是不是正确?
AB的SWATH是这样的,一个循环中,首先100ms的MS(400-1200),接下来进行32个100ms的MS/MS,第一个MS/MS的precursor ions是400-425(对Quad进行一种特殊的tune,使其可以选择这一范围的离子送到碰撞室去进行CID),第二个MS/MS的precursor ions是425-450,以此类推,第32个MS/MS的precursor ions是1175-1200,这样一个循环下来总共花费了3300ms,得到了一张MS谱图,以及32张MS/MS谱图。(为了简化描述,这里precursor ions的选择是整数,实际上Reudi做的时候,是有一个0.5Da的偏移)
按照我的理解,Waters的MSE一个扫描循环下来似乎只得到了一张MS谱图和一张MS/MS谱图,这样的话对MS/MS谱图进行解析的话,有些难以将谱图上的碎片峰与其precursor ion进行对应。当然了WATERS对此好像有解释,但我没有仔细看,不知道有没有高手对此了解的比较详细的来给大家解惑。
AB的swath虽然也不是对某个确定的m/z的precursor ion去打二级,但他们将全部的质量范围等分成了32份,至少我们知道第一张谱图的precursor ions来自400-425这个范围。即使这样,在谱图解析的难度上,这与我们常用的DDA,IDA等还是有不小的差距的,因为DDA或者IDA是选择一个确定的m/z去打二级的,每张MS/MS谱图都有一个确定m/z的precursor ion。当然了,SWATH是对全质量范围进行了MS/MS,其结构信息还是更为丰富的,DDA或者IDA只是对TOP 5, 10,20或者甚至到50,100(已经非常困难了)进行了MS/MS。若要以每张谱图都有一个确定m/z的precursor ion的要求来对全质量范围进行MS/MS的话,一个循环中要有800张二级谱图(当然要保证谱图的质量),这对扫描速度是一个极其巨大的挑战。