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液质联用（LCMS）

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主题：【已应助】新手求助Q-TOF的数据采集与定量的问题

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steven_sela

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发表于：2012/11/25 13:43:39 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小弟刚接手学校的一台agilent的LC-Q-TOF，准备测蛋白质和氨基酸等物质的分子量。

仪器之前已有老师使用过，但数据采集的条件老师没有优化过，所以每张图的数据要近400Mb。一旦分析量大，机器就容易死机。（已经被学生弄死过一次了。。。）

求问各位大大，一般做样仪器数据采集的频率一般设为多少？如果做MS/MS 碰撞池能量设多少比较合适？谢谢

PS：求问Q-TOF能否做定量？精度好不好？(从培训资料里看需要优化色谱条件，感觉这么做不如直接用LC定量)

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2012/11/26 18:57:38 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

采集频率一般在每秒钟10张左右；碰撞池的能量需要优化，化合物性质不同，能量差异较大；早期的QTof是不能做定量的，重现性很差。现在随着技术的发展，也可以采用QTof进行定量了，但是灵敏度肯定没有四极杆质谱高。色谱条件当然要优化，直接用LC定量也是要优化色谱条件的。

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steven_sela

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2012/11/27 15:08:50 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 dark_wzy(dark_wzy) 发表:
采集频率一般在每秒钟10张左右；碰撞池的能量需要优化，化合物性质不同，能量差异较大；早期的QTof是不能做定量的，重现性很差。现在随着技术的发展，也可以采用QTof进行定量了，但是灵敏度肯定没有四极杆质谱高。色谱条件当然要优化，直接用LC定量也是要优化色谱条件的。

谢谢，那看来我现在设置的每秒1张偏低了。关于定量这一点，我看培训材料中的介绍也是根据TIC图计算峰面积，会不会没有HPLC来的那么准确?

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2012/11/27 15:33:38 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 steven_sela(steven_sela) 发表:
原文由 dark_wzy(dark_wzy) 发表:
采集频率一般在每秒钟10张左右；碰撞池的能量需要优化，化合物性质不同，能量差异较大；早期的QTof是不能做定量的，重现性很差。现在随着技术的发展，也可以采用QTof进行定量了，但是灵敏度肯定没有四极杆质谱高。色谱条件当然要优化，直接用LC定量也是要优化色谱条件的。

谢谢，那看来我现在设置的每秒1张偏低了。关于定量这一点，我看培训材料中的介绍也是根据TIC图计算峰面积，会不会没有HPLC来的那么准确?

QTof使用提取离子流图（EIC或XIC）来进行峰面积积分计算的，理论上应该比HPLC准确，尤其是在色谱分离不太好的情况下。

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2012/11/27 19:28:49 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一张TIC图就400M，是不是LC的时间很长，如果出峰时间知道你可以采集中标某部分的数据就可以了
另外，不会用的是轮廓图模式吧...

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steven_sela

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2012/12/2 21:33:15 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 gosome(gosome) 发表:
一张TIC图就400M，是不是LC的时间很长，如果出峰时间知道你可以采集中标某部分的数据就可以了
另外，不会用的是轮廓图模式吧...

LC的时间是挺长的，大约30分钟左右。轮廓和质量图两种模式都保存的

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winner20091212

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2012/12/7 0:05:06 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我以前用Agilent的Q-TOF,主要是做蛋白质。看你在采集样品的时候是保存什么样的图，都可以选择的。再者换一个好点的电脑完全不会出现死机的现象。这款仪器做定性非常不错，因为分辨率特别高！然而定量却没那么完美，仪器的脾气你需要摸清楚，很多的paper里都是用EIC进行定量的，因为这个比TIC来的准确。碰撞池的能量就要根据具体的物质进行优化！

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steven_sela

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2012/12/7 22:14:57 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 winner20091212(winner20091212) 发表:
我以前用Agilent的Q-TOF,主要是做蛋白质。看你在采集样品的时候是保存什么样的图，都可以选择的。再者换一个好点的电脑完全不会出现死机的现象。这款仪器做定性非常不错，因为分辨率特别高！然而定量却没那么完美，仪器的脾气你需要摸清楚，很多的paper里都是用EIC进行定量的，因为这个比TIC来的准确。碰撞池的能量就要根据具体的物质进行优化！

谢谢，不知道您有没有用Q-TOF做过多肽？初始的质谱参数(比如Fragmentor,Skimmer,Oct RF)您通常都是怎么设的？我现在做多肽总是找不到想要的离子，在不断的尝试方法和参数，但都没有成功，很痛苦。。。

还有我想问一下Q-TOF定性的最低检出浓度一般为多少？我现在做多肽ug级的基本看不到峰，mg级才能找到像样的离子峰。。。

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