今天我给大家讲一下,我们做饲料中苏丹红的过程吧。这个指标上次扩项时就已经扩进去了,可以说非常好做,这一次让她们练这个项目,目的就是为了让熟悉一下
液相操作和积分处理。
参照的标准是《NY/T 1258-2007 饲料中苏丹红染料的测定 高效
液相色谱法》,样品经过乙腈萃取,旋蒸后,就可以上机了,回收率一般都可以95%以上。使用C18分离,梯度洗脱,一个样跑20几分钟。
一开始让她们把标准品配好,上机跑了一下,建了个标准曲线,一切都很简单,给她们讲解了两遍数据处理,就让她们自己练习了一下。下午就让她们按标准进行样品处理,处理好后,上机检测,问题就来了,加标样品中有个峰和苏丹红3没有分开,高浓度加标则完全重合。
有问题正好,给她们讲解演示一下优化色谱分离。一开始我想优化一下流动相应该很容易就能分开,但结果往往是悲催的,不管我怎么调整流动相,这个峰也没法和苏丹红3分开。很快就下班了,第二天,我又更换了好几根不同品牌的C18柱,可那个峰和苏丹红3还是那么亲密。
到这时,我想既然C18都不行,那就换个别的固定相的柱子试试,正好实验室有根极性稍微强点的苯基柱,装上平衡一下,跑了一针,果然那个峰和苏丹红3分开了一些,然后又稍微修改了一下梯度比例,将其和苏丹红3完全分开,这时那个杂峰原来还不只是一个东西,在苯基柱上,分开为两个峰,一个苏丹红3前出峰,一个在后面出峰。而且整个分离时间也缩短到不到10分钟。
我也就这个案例给她们讲解了一下,固定相极性,柱选择性,保留性能之间的关系,以及怎样选择不同固定相的色谱柱。
本来准备传几张谱图给大家看看,但电脑速度太慢,明天用单位电脑传吧。