主题：【原创】【“特色”应用方法】 黄酒中18种游离氨基酸的测定方法

1、方法制定背景

  黄酒是中国的民族特产，也称为米酒（ricewine），属于酿造酒，在世界三大酿造酒（黄酒、葡萄酒和啤酒）中占有重要的一席。黄酒黄酒营养成分主要表现在含有极其丰富的氨基酸。是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，是生物体内不可缺少的营养成分之一。研究黄酒中游离氨基酸快速、准确的测定方法，对提高黄酒产品质量，增强市场竞争力，具有十分重要的意义。

2、检测方法的制定过程

    本人有幸主要负责该分析方法的研究工作，作为方法研究需要考虑诸多方面（1）首先是方法可靠性，耐用性，不同厂家的仪器应用（2）方法操作简单（3）仪器的价格，4）样品测定的成本。18种氨基酸的有效分离是本方法的研究重点，最开始我采用国外氨基酸分析试剂包，色谱分离实验效果很好，但是方法成本高，对比了不同的氨基酸衍生方法后见表1，我采用异硫氰酸苯酯（PITC ）作为衍生试剂，色谱柱方面，我最初使用国外不同厂家的色谱柱，然而最后偶然试用了天津博纳艾杰尔科技VenusilAAC18,她出色的分离性能，令我刮目相看，下面让我来大家讲讲我黄酒中18种氨基酸分析方法制定解决方案，

3、检测条件

3.1 色谱柱：博纳艾杰尔Venusil AA C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）。

3.2 流动相A：称取1.64g无水乙酸钠（4.4），加适量水溶解，加入0.5 mL三乙胺(4.3)，用水定容至1000mL，用20%乙酸溶液（4.10）调pH至6.20，0.45 μm水系滤膜过滤。流动相B:乙腈+水=8+2（体积比），洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

3.3流速：1.0 mL /min；进样体积：10μL；柱温：40 ℃；检测波长：254 nm

4、实验过程、

4.1样品衍生

准确吸取黄酒样品1.0mL，于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，取500 μL稀释后的酒样，置于带塞试管中，加入1.2%异硫氰酸苯酯溶液（乙腈配制）250 μL、14%三乙胺溶液(乙腈配制) 250 μL，混匀，室温下放置1 h后，加入50 μL 20%乙酸水溶液，混匀。

4.2萃取净化

向上述衍生后的溶液中加入1.0 mL正己烷，涡旋混合器振荡1min，静置分层后，弃去上层正己烷溶液，采用针头注射器小心吸取下层溶液，经0.45 μm有机系滤膜过滤，用于液相色谱测定。

5、测定结果、

18种氨基酸的分离应该说对于色谱柱及梯度洗脱程序要求很高，根据优化的条件，分别采用国外不同的色谱柱与博纳艾杰尔Venusil AA C₁₈色谱柱，进行了18种氨基酸和黄酒样品的测定，可以看出Venusil AA C₁₈表现出了优异的分离性能：在30min内18种氨基酸标准品及黄酒样品中氨基酸都达到了良好的分离，（图1，图2），其分离性能丝毫不逊色于国外的同等品牌的色谱柱，而价格相对较低。

              图1 18种氨基酸标准溶液的色谱图

  博纳艾杰尔VenusilAA C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）

图A3  18种氨基酸标准品的色谱图国外产品 C₁₈（250 mm×4.6 mm, 5 μm）

图A4  18种氨基酸标准品的色谱图国外产品 C₁₈（250 mm×4.6 mm, 5 μm）

图A5  18种氨基酸标准品的色谱图国外产品 C₁₈（250 mm×4.6 mm, 5 μm）

6、结论

本文采用异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂，建立了黄酒中黄酒中氨基酸测定方法，方法系统的研究过程见附录，该方法成本低，分析速度快，尤其是本研究中采用的博纳艾杰尔VenusilAA C₁₈色谱柱具有优异的分离性能，综合色谱柱的性价比，Venusil AA C₁₈是氨基酸分析首选。