样品测定与方法改进

采用高效液相色谱法检测时，大家都会碰到这样一个问题，那就是检测单一化合物一般来说会简单些，检测混合化合物物经常会感觉比较麻烦或检测效果不好。经常遇到的困惑是检测混合物样品每种化合物所需的流动相不一样，最佳检测波长不一样，前处理方法不一样，所需的色谱柱也不一样等等。

下面我们就重点介绍下样品中多种化合物检测（最佳检测波长不一样）波长选择的问题（其它色谱条件必须一致）。

每种化合物单独检测波长选择肯定是没问题的，选择最佳检测波长一般来说效果是最好的。

样品中多种化合物同时检测，每种化合物的最佳检测波长往往是不一样的，选择检测波长一般有两种方法。一是选择一个能兼顾每种化合物的检测波长；另一种方法是采用多波长检测。如果仪器没有多波长检测功能，又不能选出一个兼容性很好的检测波长，那就只能采用多次分开检测的方法（这样很费时间、精力和费用上都是一大浪费）。

下面我们就以具体的检测为例来介绍下多波长检测效果及多波长检测奥妙吧。

首先重点介绍下检测饲料中维生素B1、B2、B6同时检测。

维生素B1检测

色谱条件

检测器：紫外（UV）检测器

波长：246nm

色谱柱：Pgrandsil STC C18（250 X 4.6mm，5um）

流动相：在已经装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mg乙二胺四乙酸二钠，待全部溶解后，加入25ml乙酸5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度，摇匀，即得

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

进样量：10ul

10ug/ml维生素B1标准品色谱图：

维生素B2检测

色谱条件

波长：267nm

其它色谱条件不变

10ug/ml维生素B2标准品色谱图：

维生素B6检测

色谱条件

波长：280nm

其它色谱条件不变

10ug/ml维生素B6标准品色谱图：

维生素B1、B2、B6混合物检测

色谱条件

波长：280nm

其它色谱条件不变

维生素B1、B2、B6各10ug/ml混合标准品色谱图：

维生素B1、B2、B6混合物检测

色谱条件

波长：0min-6.5min波长为280nm,6.5min-9.5min波长为246nm，9.5min-18min波长为267nm

其它色谱条件不变
维生素B1、B2、B6各10ug/ml混合标准品色谱图：

通过以上实验大家看到多波长检测的优势和奥妙了吧的。它解决了由单波长检测带来的两大弊端，一是单波长检测某些化合物某些成分在该波长下没有响应值，检测需多次进行；二是单波长检测某些化合物响应值较低，可能影响检测效果和结果。

另外像具有解肌清热、止泄止痢之功效的葛根芩连微丸中葛根素和黄芩苷检测也是如此，葛根素最佳检测波长254 nm、黄芩苷最佳检测波长315nm。逍遥丸中芍药苷和槲皮素含量检测，芍药苷最佳检测波长230nm、槲皮素最佳检测波长254nm。食品、饮料中添加剂色素柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝等含量检测，柠檬黄最佳检测波长428nm、苋菜红最佳检测波长521nm、胭脂红最佳检测波长494nm、日落黄最佳检测波长482nm、亮蓝627nm处吸收最强。另外还有偶氮染料、蜂蜜中黄酮、中药材肉苁蓉、食品或饲料中维生素A、D3、E同时检测等很多样品采用多波长检测都有非常明显或理想的检测效果。

被捡样品中含有多种化合物，采用多波长检测，每种化合物的响应值一定会高于或等于单波长检测，有的能高几倍、十几倍、几十倍，甚至更高。如果单波长检测样品不影响检测结果，用单波长也没问题，如果单波长检测影响到了检测结果那最好是用多波长检测了；如果仪器没有多波长检测功能，那最好就是选择每种样品单独检测，这样检测结果能保证，只是检测时间长些，检测费用高些。

有的仪器有双通道或多通道检测功能，这个功能和多波长检测有些类似，但有时还比多波长检测效果好。它能通过不同的检测通道（每个通道的检测波长都可以单独设置）把两种或多种没完全分离的化合物更准确的检测出来。

检测过程中大家要依据实验的实际情况和实验室的现有条件选择合理的检测方法。一个简单的处理可能会带来意想不到的收获，省时、省力、省费用，效果还好。

以上是我对混合化合物样品检测的一点理解，供大家参考。如有不足之处敬请多多指点！