主题：【第八届原创】纺织品中4-氨基偶氮苯的检出限、回收率的验证报告

                                          纺织品中4-氨基偶氮苯的检出限、回收率的验证报告
前言：随着GB 18401，Oeko—Tex Standard 100，Eco—Lable等多项国内外法规的实施，禁用偶氮染料的检测越来越受到重视，这些染料被人体皮肤吸收后可能在体内分解产生多种有害芳香胺，经人体的活化作用使细胞的DNA结构和功能发生改变．从而诱发细胞癌变或畸变等病变。4一氨基偶氮苯(4一amino azo benzene．简称4一AAB)是这些有害芳香胺中的一种，在Oeko—Tex Standard 100等标准中，4一氨基偶氮苯属于禁用芳香胺的一种。为了实验室在4-AAB测试上的精确度，本文分析了方法的线性范围、加标回收率、方法复现性、方法检测限等内容。

1、试验部分
1.1 仪器设备与试剂
安捷伦7890-5975C气质联用仪，毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；恒温水浴锅；振荡器；分析天平。4-氨基偶氮苯标准品，固体粉末，纯度99.0%；蒽-d10标准品，固体粉末，纯度97.8%，均购自安谱科学仪器有限公司。氢氧化钠、氯化钠、连二亚硫酸钠、叔丁基甲醚，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司，所用水为三级水。
标准溶液：4-氨基偶氮苯标准液，100mg/L，溶解在叔丁基甲醚中；蒽-d10，100mg/L内标液，溶解在叔丁基甲醚中。均保存在密封棕色样品瓶中放置冰箱冷藏，保质期1个月。蒽-d10内标工作液（2mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。4-氨基偶氮苯标准液（0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L）：用叔丁基甲醚配制，此溶液现配现用。
1.2 样品前处理
将纺织样品剪成5mm×5mm的小片，混合。从混合样中称取1.0g，精确0.01g，置于反应器中，加入9mL20g/L（pH值=13.7）的氢氧化钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使所有试样浸于液体中。打开瓶盖，再加入1.0mL200mg/mL的连二亚硫酸钠溶液，将反应器密闭，用力振摇，使溶液充分混匀。置于40℃恒温水浴中保温30min。取出后1min冷却到室温。 然后加入10mL蒽-d10内标工作液，再加入7g氯化钠，将反应器密闭，用力振摇混匀后于机械振荡器中振摇45min，静置，待两相分层后，取上层清液进行gc/MS分析。
1.3 gc-MS仪器条件
毛细管色谱柱：DB-5MS 30m×0.25mm×0.25μm；
载气：氦气（≥99.999%）；流量：1.0mL/min；
进样口温度：250℃；质谱接口温度：280℃；
离子化方式：EI，70eV；
质量扫描方式：定性分析使用全扫描（scan）方式；
定量分析使用选择离子（sim）方式，监测离子为：4-氨基偶氮苯197u，蒽-d10内标188u；柱温：50℃（0.5min），25℃/min→260℃（5min）；
进样量：1μL；进样方式：不分流进样。
在此仪器条件下，4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图和质谱图如下：

                图1  4-氨基偶氮苯和内标蒽-d10混标溶液的总离子流图

                      图2    4-氨基偶氮苯的质谱图
2、结果与讨论
2.1、方法的线性范围
线性范围是指试样浓度与响应讯号之间保持线性关系的浓度范围。配制标准系列溶液，其中4-氨基偶氮苯的浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L，标准溶液进行gc-MS分析，得到内标校正曲线。曲线的各标准点浓度回读值及曲线线性方程和线性相关系数见表1，曲线如图3.本次试验对内标曲线进行了方法线性的验证。
  表1  4-氨基偶氮苯标准曲线线性方程、线性相关系数及标准溶液浓度回读结果

标准溶液浓度/（mg/L）	标准溶液浓度回读值及回收率
	标准溶液浓度回读值/（mg/L）	回收率
0.5	0.47	94.0%
1.0	0.94	94.0%
2.0	2.02	101.0%
5.0	5.20	104.0%
标准曲线线性方程	Response=2.044e-002*Amt-2.507e-002
线性相关系数R2	0.995

                                  图3 标准曲线图
由R2及线性方程对标准溶液浓度的回读情况可认为此标准曲线线性良好，因此，4-氨基偶氮苯在0.5～5.0mg/L的范围内线性良好。
2.2 方法的准确性和重复性验证
方法的准确性验证通过加标回收率体现。在待测样品中加入一定已知浓度的标准样品，混合均匀后，按照GB/T 23344-2009方法进行前处理和仪器分析，据算回收率。回收率计算公式为：。本试验选择的是阴性样品进行加标试验，。在本试验中，通过对阴性样品进行3个浓度水平的加标试验计算回收率。试验结果见表2。
方法重复性验证是指在相同的测量条件下，对同一被测量进行连续多次测量所得结果之间的一致性。重复性的估算方法通过在同一实验室内，由同一试验人员用相同的试验设备至少做6次平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对标准偏差表示。本试验在相同的检测条件下，称取1.0g阴性纺织品样品，分别进行3个浓度水平的加标试验，每个水平进行6次平行试验，通过计算相对标准偏差RSD体现方法的重复性效果。试验结果见表2。
            表2  4-氨基偶氮苯3个水平加标试验及6次平行测定的结果

试验次数	加标水平/（mg/kg）
	5.0		10.0		50.0
	测定值	回收率	测定值	回收率	测定值	回收率
1	3.82	76.4%	6.90	69.0%	32.03	64.06%
2	3.67	73.4%	7.09	70.9%	32.21	64.42%
3	3.78	75.6%	7.20	72.0%	33.63	67.26%
4	3.95	79.0%	6.98	69.8%	30.92	61.84%
5	3.87	77.4%	7.13	71.3%	32.09	64.18%
6	4.03	80.6%	7.02	70.2%	31.82	63.64%
平均值/（mg/kg）	3.85		7.05		32.12
平均回收率	77.07%		70.53%		64.23%
标准偏差SD	0.12		0.10		0.80
相对标准偏差RSD	3.01%		1.40%		2.49%

由试验结果可见：在样品中添加水平分别为5.0mg/kg、10.0mg/kg、50.0mg/kg时，加标回收率值均在60%～80%之间，6次平行测定的平均加标回收率分别为：77.07%,70.53%,64.23%,均达到了GB/T23344-2009中对回收率60%～80%的要求。同时，3个加标水平6次平行测定的相对标准偏差RSD分别为3.01%,1.40%,2.49%，国标要求不大于10%即可，可见方法的重复性较好。综上，方法的准确度和重复性均达到了检测方法要求。
2.3 方法的复现性
复现性的估算方法：由两个不同试验人员用相同的试验条件做平行试验，测得的数据用统计的方法计算精密度，一般用相对偏差来表示。
在相同的检测条件下，由不同试验人员用同一试验设备对同一添加水平后的纺织品中4-氨基偶氮苯进行测定，分别做双样，试验结果如表3。
                          表3  复现性试验结果

检测项目	检测结果
	人员1		人员2
	1	2	1	2
4-氨基偶氮苯	6.24	6.39	6.20	5.99
平均值	6.31		6.10
相对标准偏差	1.69%

由试验结果可知，复现性的相对标准偏差为1.69%，复现性能满足检测的要求。
2.4 方法的检测限
通过对样品进行10次最低点加标试验，计算标准偏差，方法的检测限MDL以3倍标准偏差值表示，试验结果如表4。
                          表4  方法的检测限

加标浓度/（mg/kg）	5.0
样品中4-氨基偶氮苯检测值/（mg/kg）
1	3.82
2	3.67
3	3.78
4	3.95
5	3.87
6	4.03
7	3.92
8	3.88
9	4.01
10	3.90
平均值/（mg/kg）	3.88
标准偏差SD/（mg/kg）	0.10
方法检出限3×SD/（mg/kg）	0.30

由试验结果得知，本方法的检测限MDL为0.30mg/kg，进位取值0.50mg/kg。GB/T23344-2009中要求方法的检出限为5.0 mg/kg，可见本方法的检测限小于5.0 mg/kg，说明本方法达到了国标中对4-氨基偶氮苯的检测要求。
3.0 结论
试验结果显示：4-氨基偶氮苯在浓度为0.5～5.0 mg/L时，线性良好，相关系数达到0.995；方法的准确性验证试验中，样品加标回收率值在60～90%之间，达到了GB/T 23344-2009中对回收率至少在60%～80%的要求；方法重复性验证试验中，3个加标水平6次平行测定的相对标准偏差RSD分别为3.01%，  1.40%,2.49%，可见方法的重复性较好；方法复现性验证试验中，相对标准偏差1.69%，复现性良好；本方法对4-氨基偶氮苯的检测限MDL为0.5mg/kg，达到了GB/T 23344-2009中的检出限要求（5.0mg/kg）。综上所述本试验方法能够满GB/T 23344-2009测试要求。