主题：【资料】测定食品中三聚氰胺的案例

一、案例
2008年9月，我国部分地区发现报告多例婴幼儿泌尿系统结石病例，调查发现患儿多有食用某品牌婴幼儿配方乳粉，经相关部门调查，某知名乳制品公司生产的婴幼儿配方乳粉受到三聚氰胺的污染。三聚氰胺是一种化工原料，可导致人体泌尿系统产生结石，而部分不法奶农为谋求私利，在原料乳中添加了三聚氰胺，造成了震惊全国的三聚氰胺毒奶事件。
二、选用的国家标准
GB／T 22388—2008原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法——高效液相色谱法。
三、测定方法
1．样品处理
(1)液态乳、乳粉、酸乳等乳制品 精确称取样品2.00g置于50mL具塞塑料离心管中，分别加15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，大于4000r／min离心10min，取上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加5mL水混匀用于待净化液。
(2)乳酪、奶油和巧克力等制品精确称取样品2.00g置于研钵中，加入试样质量4～6倍的海砂研磨成粉状，转移至50mL具塞塑料离心管中，同时用15mL三氯乙酸溶液数次清洗研钵，将清洗液转入离心管中，离心管中加入5mL乙腈，其余同上操作，制备待净化液。
2．样品净化
将待净化液转移至固相萃取柱中(固相萃取柱的制备方法：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯一二乙烯基苯高聚物，60mg，3mL，或相当者。)使用前依次用3ml。甲醇、5mL水活化，抽至近干，用6mL氨化甲醇溶液洗脱，流速不超过1mL／min，洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物(相当于0.4g样品)用1mL流动相定容，涡旋混合1min，过0.2μm微孔滤膜后，得净化可测定样品。
3．测定
(1)高效液相色谱参考条件
①色谱柱：C8柱，250mmX 4．6mm(i．d．)，5肛m，或相当者C₁₈柱，250mmX 4．6mm(i．d．)，5μm，或相当者。
②流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液一乙腈(85+15，体积比)，混匀。C₁₈柱，离子对试剂缓冲液一乙腈(90+10，体积比)，混匀。
③流速：1．0mL／min。
④柱温：40℃。
⑤波长：240nm。
⑥进样量：20μL。
(2)标准曲线的绘制 用流动相将三聚氰胺标准储备液稀释得浓度为0.8μg／mL、2μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、80μg／mL的标准工作液，按浓度由低到高进样检测，做标准曲线。
(3)定量测定 将待测液按要求进样检测。
4．结果计算
X=A*c*V*1000/A_s*m*1000*f
式中x——试样中三聚氰胺的含量，mg／kg；
A——样液中三聚氰胺的峰面积；
c——标准溶液中三聚氰胺的浓度，μg／mL；
V——样液最终定容体积，mL；
As——标准溶液中三聚氰胺的峰面积；
m——试样的质量，g；
f——稀释倍数。
5．试剂
①5％氨化甲醇溶液：准确量取5mL氨水和95mL甲醇，混匀后备用。
②乙腈：色谱纯。
③离子对试剂缓冲液：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入约980ml水溶解，调节pH值至3.0后，定容至1L。
④1％三氯乙酸。
⑤甲醇：色谱纯。
⑥甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀。
⑦三聚氰胺标准储备液：准确称取100.Omg三聚氰胺标准品于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为lmg／mL的标准储备液，4℃避光保存。
⑧海砂：化学纯，粒度0.65～0.85mm，二氧化硅(SiO2)含量为99％。
⑨氮气：纯度大于等于99.999％。
6．仪器
①高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器。
②分析天平：感量为0.0001g和0.01g。
③离心机：转速不低于4000r／min。
④超声波水浴。
⑤固相萃取装置。
⑥氮气吹干仪。
⑦涡旋混合器。
⑧具塞塑料离心管：50mL。
⑨研钵。